己糖激酶1在被HI1感染的巨噬细胞的生存过程中的作用.docxVIP

己糖激酶-1在被HIV-1感染的巨噬细胞的生存过程中的作用Satarupa Sen，Rafal Kaminiski，Satish Deshmane，Dianne Langford，Kamel Khalili，Shohreh Amini，and Prasun K Datta关键词：细胞凋亡，葡萄糖代谢，己糖激酶，HIV-1，巨噬细胞，线粒体缩略语：HK-1，Hexokinase-1（己糖激酶-1）；Vpr，viral protein R（病毒蛋白R）；CTZ，Clotrimazole（克霉唑）；G-6-P，glucose-6-phosphate（葡萄糖-6-磷酸）；G6PD，glucose-6-phosphate dehydrogenase（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）；OMM，outer mitochondrial membrane（线粒体外膜）；VDAC，voltage-dependent anion channel（电压依赖性阴离子通道）；COXIV，Cytochrome c oxidase subunit IV（细胞色素C氧化酶亚基IV），cART，combination antiretroviral therapy（抗逆转录病毒联合疗法）；M-CSF，macrophagecolony-stimulating factor（巨噬细胞菌落刺激因子）病毒已经有多种方式来保护被感染的细胞免于凋亡。被HIV-1感染的巨噬细胞寿命长，并且被当做是储存HIV-1的容器。细胞存活还是死亡的一个重要的决定性因素是葡萄糖代谢。我们推测，HIV-1保护被感染的细胞免于凋亡，从某种程度上是通过调节宿主的糖酵解途径——更准确地说是调节己糖激酶-1（一种将葡萄糖转化为葡萄糖-6-磷酸的酶）——来实现的。因此，我们分别分析了在HIV-1接种的外周血单核细胞和长期接种HIV-1的单核细胞系U1中己糖激酶-1的调节。结果表明，HIV-1诱导己糖激酶-1的表达量显著增强。令人惊奇的是，己糖激酶的酶活性在被感染的外周血单核细胞和PMA分化的U1细胞系中被显著抑制。有趣的是，我们观察了在PMA诱导的U1细胞和HIV-1依附的蛋白——病毒蛋白R转换的巨噬细胞U937中与线粒体结合的己糖激酶-1的增长水平。使用药剂将U1细胞系线粒体中的己糖激酶-1解离出来，此过程中克霉唑诱导线粒体膜去极化和细胞凋亡蛋白酶3和7介导细胞凋亡。从病毒蛋白R转化的U937细胞线粒体中解离己糖激酶-1同样会增强细胞凋亡蛋白酶3和7的活性。这些观察结果表明，己糖激酶-1在HIV-1感染的巨噬细胞中不参与代谢，而是结合到线粒体上从而维持其完整性。这些结果表明，靶向己糖激酶-1与线粒体的相互作用从而持续诱导受到感染的巨噬细胞凋亡可能会被证明对净化成为HIV储存容器的巨噬细胞有好处。介绍单核细胞和巨噬细胞在先天性免疫防御中起重要作用。但是在HIV-1感染的情况下，巨噬细胞可以加快病毒从体表传播到大脑等末梢器官。许多研究已经证明，HIV-1感染的单核细胞和巨噬细胞是相对耐凋亡的。因此，这些生存能力强的被感染细胞可以在大脑中作为HIV-1持续存在的储存容器，也可以促使病人中枢神经系统的炎症接受抗逆转录病毒联合治疗。了解被HIV-1感染的巨噬细胞抵抗凋亡的机制对于这些病毒储存容器的靶向治疗是很重要的。被感染的巨噬细胞的对凋亡抗性可能是源于HIV-1和宿主葡萄糖代谢之间的相互作用。事实上，早期研究表明，Vpr基因可以调节巨噬细胞的糖酵解途径。葡萄糖代谢的第一步是在己糖激酶的作用下葡萄糖转化为葡萄糖-6-磷酸。在哺乳动物细胞中有4种同类型的己糖激酶：HK-1，HK-2，HK-3，HK-4。在这些同型的己糖激酶中，HK-1和HK-2可以结合线粒体。线粒体结合的己糖激酶在维持线粒体外膜完整性上起了重要作用。研究表明，己糖激酶结合于电压依赖性阴离子通道抑制了膜间蛋白收到凋亡信号刺激而释放，并抑制了凋亡。当前时代，作为病毒容器的巨噬细胞，其生命力较顽强的持久性对于规划用抗逆转录病毒联合疗法根除HIV-1的策略而言是一个重要的挑战。此外，阐明HIV-1介导的葡萄糖代谢途径阻截机制将会使我们对设计清除潜伏的HIV-1病毒的治疗策略有了更深刻的认识。在这项研究中，我们发现了HIV-1诱导单核细胞和巨噬细胞中己糖激酶-1的表达。但是，HIV-1的表达抑制了己糖激酶的活性却促使己糖激酶与线粒体结合以维持线粒体外膜的完整性。研究还发现，在巨噬细胞U937细胞中Vpr基因的过度表达增强了线粒体与己糖激酶-1的结合能力。在HIV-1感染的巨噬细胞中分离线粒体上的己糖激酶-1和克霉唑会降低线粒体膜的电势，以及诱导凋亡蛋白酶3和7介导的细胞凋亡。类似地，在病毒蛋白R转换的巨噬细胞U937中分离己糖激酶和克霉唑也能够诱导凋亡蛋白3和7的