2012年秋季期 生化理授课课件13 核酸的生物合成.ppt

教学目标 1.掌握原核生物DNA的“复制”及RNA的“转录”过程； 2.熟悉参与复制与转录的各个要素； 3.了解“PCR”技术。 13.1 DNA的生物合成 13.2 RNA的生物合成 DNA复制——依赖于DNA的DNA合成， 是主要的合成方式。 逆转录 —— 依赖于RNA的DNA合成， 主要在病毒中， 是转录的逆过程。 DNA的损伤与修复—— DNA损伤后， DNA片段的填补。 13.1.1 DNA复制—由亲代DNA合成两个相同的子代DNA的过程 1.慨念：当细胞分裂时，DNA的双链拆开并分为 两股单链，各自作为模板，用以合成新的互补链。在 两子细胞中新合成的DNA双链，都和母细胞的DNA双 链的碱基序列完成一样，其中一条链来自亲代，另一 条链为新合成的。遗传信息就这样高度准确地从亲代 传给子代。这种复制方式称为半保留复制。 3.证据：嘧度梯度离心实验。 非常有名的实验是用原核生物（大肠杆菌）做的。 15N（重N）培养基，培养若干代，大量繁殖使所有的N都被标上15——15N，称为原代，将原代接种到14N（普通N）培养基，第一代取DNA，继续培养后取第二代、第三代DNA进行绿化铯（CsCl）密度梯度离心，用溴化乙啶（EB）染料染色，在紫外光下，有DNA的发出桔黄色荧光。结果如下图： 4.参与DNA复制的有关物质 （1）DNA聚合酶（DNA pol）： 是复制中最主要的物质，全称为依赖于DNA的DNA聚合酶 （即以DNA为模板的酶），简称为复制酶（DDDP，D—DNA；D—指导，D—DNA，P—聚合酶） 特点： 模板——DNA 引物——RNA 底物——dNTP 合成方向——5/端到3/端 真核与原核的不一样 （2）DNA连接酶： （4）拓扑异构酶 拓扑是物理学上的一个名称，空间异构的意思。 用于解开DNA超螺旋结构，TOPＩ——打开一条链；TOPⅡ从中间剪开。 逆转录酶：以RNA为模板，dNTP为底物，催化5端到3端 方向合成DNA的酶（RDDP）或反转录酶，是 1970年在劳氏肉瘤、鼠白血病病毒中发现的引 起生物致癌的酶。 逆转录特点：（1）模板为单链RNA； （2）逆转录酶（RnaseH）具有专一切除 RNA—DNA杂交分子中的RNA的功能。 （3）引物为tRNA （4）底物为dNTP 如果病毒中,逆转录生成的DNA复制,就可以得到致癌的DNA复制品，侵染宿主后，整合到宿主DNA中，宿主DNA就会有致癌的DNA片段，结果引起宿主细胞发生癌变。 如果能找到这类酶（逆转录酶等）的抑制剂，就可以在不损害健康细胞的基础上达到治疗肿瘤的目的，然而，至今为止尚未找到这种专一性的抑制剂，需要继续努力。 DNA损伤 是指某些物理、化学因素的影响致使DNA局部结构发生改变的现象。DNA的损伤可造成突变或致死。 损伤的原因 物理（紫外（见下页）、高能射线、电离辐射） 化学（烷基化试剂、亚硝酸盐、碱基类似物） 生物因素（碱基对置换、碱基的插入/ 缺失造成移码） 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）是一种体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术，即无细胞分子克隆技术。PCR技术由Mullis于1985年发明，它以待扩增的两条DNA链为模板，4种脱氧核苷酸为底物，由两个可与模板双链上相对链侧翼序列杂交的引物介导，通过DNA聚合酶（常用的是Tap聚合酶)的酶促反应，快速体外扩增特异的DNA序列。PCR技术中的每轮循环包括变性、复性和延伸3个阶段。 聚合酶链式反应技术与DNA扩增 变性：　反应混合物被短期（15—30秒）加热至950C,使得模板双链DNA变性形成可