【金版新学案】2014高考生物总复习（基础回顾 考点透析 实验导航 走近高考）专题3生物技术在食品加工及其他的应用拔高精讲课件 新人教版选修1.ppt

考点三 蛋白质的提取与分离 1．常用的分离蛋白质的方法。 蛋白质的理化性质如形状、大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此可提取和分离各种蛋白质。常用的分离蛋白质的方法有凝胶色谱法、凝胶电泳法等。 (1)凝胶色谱法的原理：相对分子质量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；相对分子质量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。 (2)凝胶电泳法的原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。 2．血红蛋白的提取和分离程序。 (1)样品处理： ①红细胞的洗涤：除去杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。 ②血红蛋白的释放：使红细胞破裂，血红蛋白释放出来。 ③分离血红蛋白溶液：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来，便于下一步对血红蛋白的纯化。 (2)粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。 (3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 (4)纯度鉴定：一般用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的相对分子质量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 ?特别提醒： (1)人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。 (2)红细胞洗涤过程中，洗涤3次后，上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白。离心时转速要低，时间要短，否则白细胞等会一同沉淀，达不到分离效果。 (3)血红蛋白释放过程中，蒸馏水的作用是涨破红细胞，甲苯的作用主要是溶解细胞膜。 【例3】以下关于猪血红蛋白提纯的描述中，不正确的是(　　) A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂 B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少 C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测 D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢 解析：猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少，是提纯血红蛋白的理想材料。提纯血红蛋白分四步：红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析，其中洗涤红细胞时，要用生理盐水反复洗涤，既要将红细胞洗涤干净，又要不破坏红细胞，然后再用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂，释放出血红蛋白。分离提纯血红蛋白时用凝胶色谱法，是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质，相对分子质量大的蛋白质移动速度较快；血红蛋白的颜色可用于观察红色区带的移动情况，并据此判断分离效果。故D不正确。 答案：D 3．(双选)在血红蛋白的提取和分离实验中，下列操作正确的是( ) A．分离红细胞时需去除上层透明的黄色血浆 B．红细胞释放出血红蛋白时只需加入蒸馏水 C．分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D．洗脱时，待红色蛋白质接近色谱底端时，用试管收集流出液 解析：血红蛋白的释放：加蒸馏水到原血液的体积，再加40%体积的甲苯，充分搅拌10 min，红细胞破裂释放出血红蛋白；分离血红蛋白溶液是以2 000 r/min的速度离心10 min，从而将溶液分成四层。 答案：AD 考点四 多聚酶链式反应扩增DNA片段 1．细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR技术)的比较。 子链 合成 温度 能量 引物 酶 解旋 两条子链均连续合成 一条链连续(先导链)，另一条链不连续，先合成片段，再由DNA连接酶连接(滞后链) 高温 体内温和条件 不加 ATP DNA或RNA RNA Taq DNA聚合酶 解旋酶，DNA聚合酶，DNA连接酶 80～100 ℃高温解旋，双链完全分开 解旋酶，边解旋边复制 不 同 点 PCR 细胞内DNA复制 ①提供DNA模板 ②4种脱氧核苷酸作原料 ③子链延伸的方向都是从5′端到3′端 相 同 点 PCR 细胞内DNA复制 续上表： 2.PCR反应的过程及结果。 (1)PCR反应过程： ①变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链，如图： ②复性：系统温度下降至50 ℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图： ③延伸：当系统温度上升至72 ℃左右，溶液中的4种脱氧核苷酸(A、T、G、C)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如下图： (2)结果： ①PCR一般要经历三十多次循环，每次循环都包括变性、复性、延伸三步。 ②两引物之间的固定长度的DNA序列呈指数扩增。 特别提醒： DNA复制需要引物的原因：DNA聚合酶不能从5′端开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。 【例4】　多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历三十多次下述循环：95 ℃条件下使模板DNA变性、解链→55 ℃条件下复性(引物与DNA模板链结合)→72 ℃条件下引物链