中国乙脑病毒病原学特征课件.pptVIP

中国乙脑病毒的病原学特征 王环宇 中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所 病毒性脑炎室 乙脑病原学背景 1949年，在中国北京分离到乙脑病毒。黄祯祥先生 黄祯祥，王逸民. 北京市流行性脑炎病毒的分离及鉴别. 中华医学杂志，1951，37（4）：280-285. 1970年代，在中国使用乙脑灭活疫苗株（P3）。 1982年，马中使用的疫苗株（SA14-2-8）。陈伯权先生 Bo Quan Chen and Barry J. Beaty. Japanese encephalitis vaccine (2-8 strain) and parent (SA14 strain) Virus in Culex tritaeniorhynchus mosquitoes. Am. J. Trop. Med. Hyp., 31(2), 1982, 403-407. 1989年，人中使用的减毒活疫苗株 （SA14-14-2）。余永新先生 从2001-2006，在全国18个省开展乙脑病原学监测工作，共分离并鉴定到 100余株乙脑病毒。 分子流行病学分析显示，目前中国乙脑病毒为基因1型和基因3型共同流行。 Huan Yu Wang, Tomohiko Takasaki, Shi Hong Fu, et al. Molecular epidemiological analysis of Japanese Encephalitis virus (JEV) in China. J Gen Virol., 88, 2007, 885-894. 标本采集－广西省（2005－2006） north latitude : 24°30′～29°30′ Altitude: 670m～7640m Yunnan Province Northwest of Yunnan China 标本分拣、运输及保存 取出 倒出标本 标本分类 标本分装 剔除雄蚊 放入-20 ℃冰箱 取出 液氮 BHK-24h BHK-48h BHK-P3-24h BHK-72h BHK-P3-48h BHK-P3-72h BHK-LN02-104-48h BHK-LN02-104-72h BHK-LN02-104-24h C6/36-24h C6/36-48h C6/36-P3-24h C6/36-72h C6/36-P3-48h C6/36-P3-72h C6/36-LN02-104-48h C6/36-LN02-104-72h C6/36-LN02-104-24h 病毒的细胞病变和动物试验 BHK-21 细胞 72小时出现细胞病变 圆缩、脱落 C6/36细胞 72小时出现病变时间 圆缩、聚集、融和 乳鼠3-4天，发病死亡 细胞病变和动物试验 ELISA检测 IFA检测 (× 40) A B C D 采用 3 种抗体用ELISA方法 乙脑病毒多克隆抗体 甲病毒多克隆抗体 布尼亚病毒多克隆抗体 病毒与乙脑抗体反应 病毒与甲病毒组特异抗体反应 病毒与以上 3 种抗体均不反应 血清学检测 乙脑病毒基因组结构 乙脑病毒 E 基因区段扩增引物 引物名称 955F 1556F 1970F 1606R 2101R 2536R 868F 1568R 1478F 2091R 2142R 2036F 2043F 2509R 扩增区段 E E E E E E E1 E1 E2 E2 for genotype1 E2 for genotype3 E3 for genotype1 E3 for genotype3 E3 序列 (5’-3’) TGYTGGTCGCTCCGGCTTA GAGTGGAYTRAACACTGAAGCG CCYTGYAAAATTCCGATTGTCTC GACYTYGAMCCCACGGTCAT TCYATCTCVAHCAGCACCTTTG AAGATGCCACTTCCACAYCTC AYCCTGGYTAYGCTTTCCT GTTCAGTCCACTCCTTGGYTCACA TACWGTAACWCCMAATGCTC CCAGCACCTTTGAGTTRG CTYCCCTYCCAACTMCGA GCTGGTRACAGTRAACCCCTTCGT ACAGTGAACCCCTTCGTCG TTTCTTGTGATGTCAATGGC 位点 (nt) 955-973 1556-1577 1970-1992 1587-1606 2080-2101 2516-2536 868-886 1545-1568 1478-1497 2