血浆脂蛋白琼脂糖电泳课件.pptVIP

根据三原色原理叠加后的单色形成了第三种颜色并脱离了原本的单色颜色更加丰富象征着产品在原有空间的组合中产生了突破性的变化 根据三原色原理叠加后的单色形成了第三种颜色并脱离了原本的单色颜色更加丰富象征着产品在原有空间的组合中产生了突破性的变化 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 【目的】 掌握脂蛋白的分类及其代谢特点。 掌握脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳检测的原理，熟悉其方法 。 * 琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。 D-半乳糖 3,6-脱水-L-半乳糖 琼脂糖（agarose） 【原理】 * * 血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液中电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状分离成不同区带。 【原理】 * 血清脂蛋白(lipoprotein)的组成 * 分类 1. 按电泳法分 ?? + β 前β α 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳图谱 乳糜微粒 按其移动的快慢，可将脂蛋白依次分为：α-脂蛋白、 前β-脂蛋白、β-脂蛋白，乳糜微粒在原点不动。 * 2. 按超速离心法分 乳糜微粒(CM) 极低密度脂蛋白 (VLDL) ? 低密度脂蛋白(LDL) 高密度脂蛋白(HDL) ? 密 度 颗 粒 * （三）结 构 特 征 CM VLDL (前β) LDL (β） HDL （α） 甘油三脂 胆固醇 蛋白质 带电量（Q）pH8.6为例 颗粒大小（mm） 密度 电泳速度 形态 多 多 少 少 大 低 慢 规则 不规则 少 少 多 多 小 高 快 * pH 8.6 pI ，各种脂蛋白均带负电，电泳时由负极到正极；VLDL为圆形，受阻力小，LDL形态不规则，受阻力大，所以VLDL跑在前。 加样槽 β 前 β α CM LDL VLDL HDL — + * 【试剂与器材】 1.人血清（预染） 2.微量加样器 3.电泳仪、电泳槽 4.琼脂糖 5.巴比妥缓冲液（pH8.6） * 【操作】 血清预染 制胶 适量琼脂糖 适量缓冲液 琼脂糖胶溶液 Δ * 1 2 3 4 40mL 点样孔朝负极 – + 去封口胶布 * 血清预染 制胶 点样 3 倒上缓冲液，使其恰好没过点样孔。 * 血清预染 制胶 点样 预染色的标本（15μL） 3 倒上缓冲液，使其恰好没过点样孔。 小心！！！点样孔不要戳破 * 血清预染 制胶 点样 电泳 80－100V， 20－30min, 负极向正极 医学下载吧 根据三原色原理叠加后的单色形成了第三种颜色并脱离了原本的单色颜色更加丰富象征着产品在原有空间的组合中产生了突破性的变化 根据三原色原理叠加后的单色形成了第三种颜色并脱离了原本的单色颜色更加丰富象征着产品在原有空间的组合中产生了突破性的变化 医学下载吧 * 半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷