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HPLC法测定离体葡萄叶中茋化物含量 　　摘要：采用HPLC法测定新疆红提（Vitis vinifera cv. Red globe）和紫香无核（Vitis vinifera cv. NO.4 Xin nong）离体葡萄叶片中的白藜芦醇、白藜芦醇苷、紫檀茋、ε-二聚体葡萄素4种茋化物的含量。结果表明，4种茋化物的线性关系良好，相关系数为0.999 0～0.999 3，平均回收率为90.2%～109.2%。新疆红提和紫香无核离体葡萄叶片中4种茋化物含量不同，红提葡萄叶茋化物含量相对较高，其中白藜芦醇苷含量最高达23.73 μg/g。2种葡萄叶的茋化物含量依次均为白藜芦醇苷紫檀茋白藜芦醇ε-二聚体葡萄素。高效液相色谱法灵敏度高，适用于葡萄叶中4种茋类化合物含量测定。 　　关键词：新疆红提（Vitis vinifera cv. Red globe）；紫香无核（Vitis vinifera cv. NO.4 Xin nong）；茋化物；离体葡萄叶；高效液相色谱法 　　中图分类号：S132；O945.78 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）10-2411-03 　　茋类化合物是具有均二苯乙烯母核或其寡聚物一类化合物的总称。1976年，Langcake和Pryce首次发现葡萄（Vitis riparia）的叶片受紫外线照射、机械损伤及真菌感染时白藜芦醇会迅速增加，认为白藜芦醇是在逆境或遭遇到病原侵害时分泌的一种植保素[1]。近年来，研究证实葡萄、花生、虎杖等植物材料中不但含有白藜芦醇，而且含有云杉苷、ε-二聚体葡萄素（ε-viniferin）、紫檀茋等其他茋类化合物[2，3]。作为植保素的重要组成成分，茋类化合物除了能提高植物的抗病性外，还具有较好的药理活性，譬如调脂、保肝、抗血栓和抗肿瘤作用[4]，而其中的白藜芦醇则具有抗衰老、皮肤保健和美容功效[5，6]，其药用价值受到广泛关注。目前，白藜芦醇主要通过植物提取、化学合成和植物组织细胞培养等方法获得，其中从植物中提取的白藜芦醇天然安全，符合人们“绿色消费”的要求。因此，天然白藜芦醇具有广阔的应用前景。 　　新疆葡萄资源极为丰富，为保证果实品质，葡萄种植期间需要多次除去植株外周叶，其中以采摘葡萄后越冬除叶操作产生的废弃叶为最，每亩地最多可产生成吨葡萄叶。因此，葡萄叶作为茋类化合物的新资源，不仅具有较大的开发潜力，还可提高葡萄产业的附加值。但另一方面??利用HPLC法同时对多种茋类化合物检测时常受到植物多酚的干扰，样品需要液液萃取[7，8]等前处理，目前采用乙醇提取法，安全低毒，且可提取多种茋类化合物[9]。本研究通过超声辅助提取和HPLC法，建立葡萄叶片中白藜芦醇、白藜芦醇苷、紫檀茋、ε-二聚体葡萄素4种茋类化合物的快速分析方法，为葡萄叶片的开发应用奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　采摘石河子秋季生长健壮、长势一致的美国红提（Vitis vinifera cv. Red globe）和紫香无核（Vitis vinifera cv. NO.4 Xin nong）的后期中间叶龄葡萄叶片（含叶柄，大小相近），用去离子水洗净，在暗室中用1∶10（V/V）去离子水浸泡12 h，沥干，置于-80 ℃冰箱保存，备用。 　　白藜芦醇（resveratrol，Res），白藜芦醇苷（polydatin，PD）、紫檀茋标样（Pterostilbene，PS）购于Sigma公司，纯度≥98%；ε-二聚体葡萄素（ε-viniferin，ε-VF）购于云力西公司，纯度≥98%。 　　95%（体积分数）乙醇，购于天津市富宇精细化工有限公司。 　　1.2 仪器 　　LC-15C型高效液相色谱仪（日本岛津公司），KQ5200DE型超声波清洗器（昆山市超声波仪器厂），AB1042N型分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），SB-1000型旋转蒸发仪 （上海爱朗仪器有限公司）。 　　1.3 方法 　　1.3.1 前处理 取冷冻紫香无核和红提叶，迅速粉碎研磨，分别称取5 g于烧杯中，加100 mL 70%（体积分数）乙醇[10]，超声提取3次，合并提取液，浓缩干燥。用甲醇定容至10 mL后，过0.25 μm微孔滤膜，待测。 　　1.3.2 标准溶液的配制 分别称取Res 1.2 mg，PD 1.9 mg，PS 1.3 mg和ε-VF 2.3 mg，定容至10 mL，配制成525、487、507、506 mmol/L的标准母液，备用。 　　1.3.3 色谱条件 色谱柱Atlantis C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流速为1.0 mL/min；柱温为25 ℃，检测波长为306 nm，进样体积为20 μL。采用二元梯度洗脱，流动相A为乙