HPLC法测定“柴芩”注射液中柴胡皂苷A和黄芩苷含量.docVIP

HPLC法测定“柴芩”注射液中柴胡皂苷A和黄芩苷含量 　　摘要：分别建立了测定“柴芩”注射液中柴胡皂苷A和黄芩苷含量的高效液相色谱方法。 　　关键词：“柴芩”注射液；柴胡皂苷A；黄芩苷；HPLC 　　中图分类号：R284.1；O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）19-4776-03 　　“柴芩”注射液是四川农业大学动物医学院自主研制的纯中药注射剂，由小柴胡汤中的核心药对柴胡和黄芩两味中药配伍而成。本制剂能“清透半表之邪和清泻半里之热”，具有和解表里、疏肝解郁、扶正祛邪之功效，临床可用于急性热性病的进行期，以及伴有发热病的一般性胃病、胃肠障碍等症[1-3]。为了建立该制剂的质量标准，有效地评价其内在质量，本试验根据“柴芩”注射液的提取工艺、临床功效和有效成分[4，5]，采用高效液相色谱（HPLC）法定量检测了柴胡皂苷A和黄芩苷的含量，为有效控制其质量提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器 　　黄芩苷对照品（中国生物制品检定所，批号：110715-20815）；柴胡皂苷A对照品（中国生物制品检定所，批号：110777-200406）；甲醇、磷酸（色谱纯）均购于科密欧化学试剂厂；“柴芩”注射液20091230）由四川农业大学动物医学院药学实验室制备。 　　1.3 对照品溶液的配制 　　1.4 液相色谱条件 　　1.5 样品处理 　　1.5.1 柴胡皂苷A供试品的制备 分别量取3批“柴芩”注射液（091228-091230）以0.45 μm微孔滤膜过滤，即得柴胡皂苷A供试品；并按处方制备不含柴胡的阴性对照品，按照柴胡皂苷A供试品溶液的制备方法制成不含柴胡皂苷A的阴性样品。 　　1.5.2 黄芩苷供试品的制备 分别量取3批“柴芩”注射液（091228-091230）各1 mL于5个100 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混合均匀，0.45 μm滤膜过滤，取续滤液作为黄芩苷供试品溶液；并按处方制备不含黄芩的阴性对照品，按照黄芩苷供试品溶液的制备方法制成不含黄芩苷的阴性样品。 　　1.6 标准曲线的绘制 　　1.6.1 柴胡皂苷A标准曲线的绘制 分别吸取柴胡皂苷A对照品溶液2、4、6、8、10、12 μL进样，HPLC检测。每个浓度设3次重复，以柴胡皂苷A对照品含量（x）为横坐标，以峰面积（y）为纵坐标，绘制标准曲线。 　　1.6.2 黄芩苷标准曲线的绘制 分别取吸取黄芩苷对照品溶液1、2、4、6、8、10 μL进样，HPLC检测。每个浓度设3次重复，以黄芩苷对照品含量（x）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标，绘制标准曲线。 　　2 结果与分析 　　2.1 方法的选择性 　　分别吸取柴胡皂苷A对照品、“柴芩”注射液和不含柴胡皂苷A阴性样品溶液各10 μL进行分析。在柴胡皂苷A检测色谱条件下，柴胡皂苷A的保留时间为8.342 min，供试品保留时间与对照品保留时间一致，阴性样品中没有发现干扰测定“柴芩”注射液中柴胡皂苷A的成分，结果见图1、图2和图3。再分别吸取黄芩苷对照品溶液、“柴芩”注射液和不含黄芩苷阴性样品溶液各10 μL进行测定，在黄芩苷检测色谱条件下，黄芩苷的保留时间为9.725 min，供试品保留时间与对照品保留时间一致，阴性样品在对照品色谱峰相应位置上无吸收峰，表明对测定无干扰，结果见图4、图5和图6。 　　2.2 标准曲线 　　2.3 精密度试验 　　2.4 稳定性试验 　　吸取柴胡皂苷A和黄芩苷供试品溶液各10 μL，分别在0、2、4、6、8 h进样，测得柴胡皂苷A峰面积RSD为1.81%、黄芩苷峰面积RSD为1.82%。结果表明供试样品在制备后8 h内稳定。 　　2.5 重复性试验 　　2.6 加样回收率试验 　　2.6.1 柴胡皂苷A的加样回收率 吸取1 mL柴胡皂苷A对照品溶液（0.48 mg/mL），60℃下烘干，残渣分别加入10 mL已知含量的样品溶液（091228）中，0.45 μm微孔滤膜过滤后进样10 μL。HPLC检测，连续6次，测定柴胡皂苷A的峰面积。结果显示柴胡皂苷A的平均回收率为102.60%，RSD为0.95%。 　　2.6.2 黄芩苷的加样回收率 吸取2.5 mL黄芩苷对照品溶液（0.46 mg/mL），60 ℃烘干，残渣分别加入5 mL已知含量样品溶液（091228）中，超声溶解后再吸取1 mL加入100 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，0.45 μm微孔滤膜过滤后进样10 μL。HPLC检测，连续6次，测定黄芩苷的峰面积。结果显示黄芩苷平均回收率为100.55%，RSD为1.69%。 　　2.7 样品含量测定 　　取3批注射液（091228-091230）按“1.5”项