酶工程第11章兰州大学酶工程非水酶学.pptVIP

第十一章 非水酶学 非水酶学的研究历史 非水酶学的研究历史 非水酶学的研究历史 非水酶学的研究历史 非水相中酶催化的优点 非水相中酶催化的优点 非水相中酶催化的优点 一、非水酶学中的反应介质 2. 水-有机溶剂两相体系 3. 反胶束体系 反胶束体系的特点 4. 正胶束体系 几种表面活性剂的结构式 几种表面活性剂的结构式 5. 微水有机溶剂单相体系 酶分散在微水有机溶剂单相体系中 6. 无溶剂或少溶剂体系 7. 超临界流体体系 超临界流体的相图 超临界萃取 超临界萃取 酶在超临界流体中催化反应的特性 酶在超临界流体中催化反应的特性 8. 离子液体体系 离子液体体系 酶在离子液体体系中催化反应的特点 酶在离子液体体系中催化反应的特点 酶在离子液体体系中催化反应的特点 二、水对有机介质中酶催化的影响 1．水对酶分子空间构象的影响 必需水量的差异 2．水对酶催化反应速度的影响 最适水含量的变化 水含量和水活度对PSL催化酯合成速度的影响 3．水活度 逸度的概念 活度的概念 最适水含量和最适水活度与溶剂极性大小的关系 结合水和游离水 三、有机溶剂对有机介质中酶催化的影响 不同的酶耐有机溶剂的能力不同 用于有机介质的酶的处理 有机溶剂分子与酶的结合 有机溶剂的极性对酶活性的影响 有机溶剂极性的选择 酶反应底物和产物的传质 有机溶剂的极性对传质的影响 四、酶在有机介质中的催化特性 溶剂极性与底物疏水性对酶反应速度的影响 2．立体异构专一性 有机溶剂中蛋白酶专一性的改变 3．区域选择性 区域选择性举例 脂肪酶催化1,4-二丁酰-2-辛基苯与丁醇之间的转酯反应 4．热稳定性 有机介质中水含量对酶热稳定性的影响 某些酶在有机介质与水溶液中的热稳定性 5．pH印记 有机缓冲液 必需水与酶分子的结构和性质有密切关系。不同的酶所要求的必需水量差别很大。例如，每分子凝乳蛋白酶只需50分子的水，就可以维持其空间构象；而每分子多酚氧化酶却需要350分子水，才能显示其催化活性。 有机介质中水的含量对酶催化反应速度有显著的影响。在水含量较低时，酶的催化反应速度随水含量的增加而升高。催化反应速度达到最大时所需的最低含水量称为最适水含量。 由于反应体系中的水分布在酶分子、有机溶剂、固定化酶的载体或修饰酶的修饰剂等之中，因此，即使采用相同的酶，反应体系的最适水含量也会随着有机溶剂的种类、固定化酶载体的特性、修饰剂种类等的变化而有所差别。在实际应用时应当根据实际情况，通过实验确定最适水含量。 PSL——假单胞菌脂肪酶 为了更为确切地反映水与酶催化活性的关系，引入了水活度的概念。水活度（water activity，Aw）是指体系中水的逸度与纯水逸度之比。通常可以用体系中水的蒸汽压与相同条件下纯水的蒸汽压之比表示，即 Aw = P/P0 式中，P为在一定条件下体系中水的蒸汽压，P0为在相同条件下纯水的蒸汽压。 对于理想气体 对于实际气体 经校正 式中， ， 为实际气体的逸度， 为逸度系数。 对于理想溶液 对于真实溶液 经校正 式中， 研究表明，在一般情况下，最适水含量随着有机溶剂极性的增加而增加，而最适水活度与溶剂极性的大小没有关系。所以采用水活度作为参数来研究有机介质中水对酶催化作用的影响更为确切。 在有机介质中含有的水，主要有两类，一类是与酶分子紧密结合的结合水，另一类是溶解在有机溶剂中的游离水。 研究表明，在有机介质体系中，酶的催化活性随着结合水量的增加而提高。在结合水量不变的条件下，体系中水含量的变化对酶的催化活性影响不大。因此可以认为，在有机介质体系中，结合水是影响酶催化活性的关键因素。 有机溶剂是有机介质反应体系中的主要成分之一。常用的有机溶剂有辛烷、正己烷、苯、吡啶、叔丁醇、丙醇、乙腈、环己烷、二氯甲烷等。在有机介质体系中，有机溶剂对酶的活性、酶的稳定性、酶的催化特性及酶催化反应的速度等都有显著的影响。 在有机介质中，酶分子不能直接溶解，而是悬浮在溶剂中进行催化反应。有些酶在有机溶剂的作用下，其空间结构会受到破坏，从而使酶的催化活性受到影响，甚至引起酶的变性失活。不同的酶，其耐有机溶剂的能力有差异。有些酶，如脂肪酶、蛋白酶、多酚氧化酶等，在有机溶剂中其整体结构和活性中心基本上保持完整，能够在适当的有机介质中催化反应。 要使酶悬浮于有机介质中催化反应，通常要将酶制剂进行冰冻干燥。在酶的冰冻干燥过程中，应当加入蔗糖、甘露醇等冰冻干燥保护剂，以减少酶的失活。 酶在有机介质中与有机溶剂接触，酶分子的表面结构将有所变化。 枯草杆菌蛋白酶晶体原来有119个与酶分子结合的