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玉米APRT基因克隆及特征分析 　　摘要 腺嘌呤磷酸核糖基转移酶（APRT， adenine phosphoribosyltransferase）是催化腺嘌呤碱基转化为腺嘌呤核苷一磷酸（AMP）的关键酶。运用生物信息学，RT-PCR和RACE方法，从玉米叶片中克隆了1个1 202 bp的APRT基因cDNA片段，命名为ZmAPT2（GenBank登录号为AY485263）。该cDNA包含1个642 bp的开放阅读框，编码214个氨基酸。RPS-BLAST分析表明，玉米ZmAPT2蛋白有腺嘌呤磷酸核糖基转移酶的催化结构域。推导的玉米ZmAPT2氨基酸与水稻2型、小麦2型、拟南芥2型、大麦的APRT具有较高序列相似性，一致率分别为79%、75%、56%、56%。 　　关键词 腺嘌呤磷酸核糖基转移酶（APRT）；RT-PCR；RACE；玉米 　　中图分类号 S513；Q785 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）22-0022-03 　　Cloning and Characterization of the APRT Gene from Maize 　　YU Zhan-Wang 1 YE Chun-Jiang 2 　　（1 Shenzhen Institute of Technology，Shenzhen Guangdong 518040； 2 University of Jinan） 　　Abstract Adenine phosphoribosyltransferase（APRT） is an important enzyme for its ability to convert adenine into AMP.The full-length with 1 202 bp cDNA of maize APRT was cloned through a combination of bioinformatics， RT-PCR and RACE，named as ZmAPT（GenBank accession number was AY485263）. The cDNA contained an ORF of 642 bp，which coded for a polypeptide of 214 amino acids. RPS-BLAST analysis demonstrated that the maize ZmAPT2 protein contained a catalyzed domain of APRT.The deduced amino acid of ZmAPT2 showed 79%，75%，56% and 56% identity with rice form 2，wheat form 2，A.thalina form 2 and barley respectively. 　　Key word adenine phosphoribosyltransferase（APRT）；RT-PCR；RACE；maize 　　随着人类及一些模式生物（拟南芥、水稻、玉米）基因组计划的进行，克隆和测序的基因和EST序列越来越多，使得生物信息学应运而生，并日臻完善，为基因快速克隆开创了广阔的前景。基因的电子克隆是近年来伴随着基因组计划和EST计划发展起来的基因克隆新方法。它的主要原理是利用日益发展的生物信息学技术，借助计算机的巨大运算能力，通过EST或基因组的序列组装和拼接，进一步利用RT-PCR的方法快速克隆功能基因[1]。目前已有很多学者利用这种方法克隆功能基因，但是电子克隆有时难以获得完整的5′端序列[2]。cDNA末端快速扩增技术（RACE）能从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5′和3′末端，在结构和功能研究中发挥着重要作用。 　　在生物体内ATP的动态平衡有赖于2条合成途径，即从头合成途径和补救途径，在补救途径中，同样存在2种腺嘌呤转变为AMP的方式：①腺嘌呤磷酸核糖基转移酶（APRT，EC2.4.2.7）催化的一步反应方式；②连续由核苷磷酸化酶、腺苷酸激酶催化的方式。体内标记试验证明：植物体内一步催化方式是补救途径的重要方式，APRT是补救途径中的1个关键酶。从拟南芥、水稻、小麦、大麦、番茄和蔷薇中都分离克隆了该酶的编码基因[3]。 　　有研究表明拟南芥中APRT基因突变导致APRT酶活性降低，细胞分裂素水平下降，突变体呈明显的雄性不育[4-5]，并显示APRT参与细胞分裂素的代谢[6]。该研究利用RACE技术扩增全基因的优点和丰富的EST数据资源，结合生物信息学的方法首次报道了玉米APRT基因的克隆和序列分析。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试材料 　　玉米种子