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四川省人民医院 乔宁 真菌感染与实验室诊断进展 真菌感染日趋增加  患者年龄的增高  广谱抗生素的应用  更多、更复杂的医疗手段（如移植等）  高强度细胞毒性治疗的应用  免疫抑制剂的应用  其它病因死亡率相对降低 真菌是院内感染常见微生物 占院内感染的--7.5% 血液感染的--第四位 肿瘤病人发病率--为8% 严重创伤、烧伤病人--高达16% 死亡率高--达55%~70% 真菌感染的流行病学概况 真菌感染的第一个变化：深部真菌感染上升，其中曲霉菌感染明显上升；  近20年真菌感染的第二个变化：白色假丝酵母菌比例减少，其他念珠菌的比例上升。 曲霉菌引起全身感染的病例已不罕见，死亡率增加。 真菌感染的危险因素 基础疾病 广谱抗生素使用 静脉插管及各种侵袭性操作 肾上腺糖皮质激素、免疫抑制剂、放射性或化学治疗后、器官移植后 高龄（65岁）、婴幼儿 住院时间长，尤其是入住ICU大于5天以上 真菌概述 浅部真菌 深部真菌 双相型真菌 真菌感染的分类 根据真菌侵犯人体的部位分为四类： 浅表真菌病 皮肤真菌病 皮下组织真菌病 系统性真菌病 浅部真菌病 深部真菌病 临床常见的真菌病 浅表真菌病 花斑癣 掌黑癣 毛结节菌病 皮肤真菌病 皮肤癣菌病 —手足、体股、头、甲 皮肤念珠菌病 皮下真菌病 孢子丝菌病 着色芽生菌病 暗色丝孢霉病 足菌肿 系统性真菌病 念珠菌病 曲霉病 隐球菌病 接合菌病 双相真菌感染 浅部真菌病 限于皮肤最外层，甲板、毛发和粘膜的感染。 主要的感染是皮肤癣菌病和浅表念珠菌病。 大多轻微，容易诊断，对治疗反应良好。 手、足、甲癣—最常见的真菌病 各种头癣：传染、危害健康 皮下真菌病—往往经过外伤发病 孢子丝菌病 着色芽生菌病 系统性真菌病 常起源于肺，可以播散到全身许多器官,严重的可引 起死亡。 常通过吸入致病菌孢子而获得，其致病菌腐生于土壤或腐败有机物中，或作为植物致病菌。 病原体可分为两组：真正的致病菌和条件致病菌。 系统性真菌病—危及生命 系统性真菌病主要的致病真菌 荚膜组织胞浆菌 粗球孢子菌 皮炎芽生菌 巴西副球孢子菌 临床常见的条件性真菌感染 念珠菌病: 最常见，血源感染的第4位。 曲霉菌病: 常见于干细胞移植、实体器官移植、大剂量化疗患者。 隐球菌病: 艾滋病人患病率为10-20%。 接合菌病（毛霉病）:多见于重症糖尿病、烧伤病及器官移植病人。 临床有增多趋势的条件致病性真菌 非白念念珠菌感染 毛孢子菌感染 地霉感染 镰刀菌感染 枝顶孢霉感染 暗色真菌感染 马尔尼菲青霉 真菌感染的诊断方法 真菌镜检 真菌培养 组织病理 生理生化 血清学方法 分子生物学 真菌镜检 革兰染色 各种真菌均染成革兰阳性 直接镜检 氢氧化钾（KOH）标本 墨汁标本 隐球菌 其它染色(糖原染色、镀银染色、乳酸酚棉蓝染色等)，组织病理学 真菌直接镜检的操作 1.采集标本于载玻片上，滴加10%KOH一滴 2.覆上盖玻片并微加热，略加压制片后作镜检 3.查见真菌的有形成分（菌丝、孢子）即为阳性，反之，则为阴性 真菌直接涂片的诊断价值 最重要又基本的检测方法，一般医院都能开展，能为临床提供及时的诊断依据。 发现真菌的有形成分如菌丝、假菌丝或较多的孢子往往提示真菌感染。 根据菌丝、孢子的形态，部分可确定病原菌 隐球菌：墨汁涂片中可见厚而透亮的荚膜 念珠菌：假菌丝及芽孢 马拉色菌：粗短如香蕉状的菌丝和圆形的孢子 毛霉菌：粗大而不分隔的菌丝 念珠菌病-直接镜检 隐球菌病—直接镜检 新 型 隐 球 菌 组织病理学 阿申蓝染色 HE PAS 组织学特点 Immunochemistry 皮肤隐球菌病的组织病理学 菌丝 孢子 曲霉病的 组织病理学 Prof. Richardd Calderone’s lecture-2006, Beijing 曲霉病 曲霉头 双分支菌丝 曲霉病——直接镜检 双分支菌丝 曲霉头 接合菌（毛霉）病—直接镜检 粗大无分隔菌丝 真菌的培养 培养特性： 营养要求不高，在 沙 保（Sabouraud）培养基上， PH4～6生长良好，需氧。 浅部真菌： 22～28℃，生长缓慢，大多于1～2 周出现典型菌落。 深部感染真菌：37℃长的最好，生长较快，3～4 天即长出菌落。 真菌各种培养法 常用真菌培养基及用途 培 养 基 用 途 沙保培养基 真菌的常规培养 放线菌酮－氯霉素琼脂 同上 玉米粉聚山梨酯－80琼脂 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA） 观察真菌菌落色素，用于鉴别真菌 尿素琼脂 用生化反应鉴别真菌