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低温产甲烷复合菌系选育及干、湿发酵比较 　　摘要：将3个低温厌氧环境样品Y、S、Z进行干、湿发酵低温驯化，选育适宜低温干、湿发酵的稳定、高效产甲烷复合菌系。样品Y、S、Z在（19±0.5）℃条件下进行干发酵低温驯化，分别在第6代、第7代、第6代产气基本稳定，第8代65 d总产气量分别为42.60、40.50、41.70 L，总固体（TS）产气率分别为266.25、253.13、260.63 L/kg。复合菌系Y最适接种量为25%，甲烷含量最高为72.9%，COD去除率最高为77.17%；样品Y、S、Z在相同条件下进行湿法酸化发酵低温驯化，分别在第7代、第7代、第8代产气基本稳定，第9代55 d总产气量分别为35.48、34.52、33.78 L，TS产气率分别为221.75、215.75、211.13 L/kg； 3组复合菌系稳定世代在干发酵和湿法酸化发酵中均使得沼气发酵启动期比第1代提前5 d以上。经差异显著性分析，相同发酵方法下不同复合菌系间总产气量差异达到显著水平。 　　关键词：低温驯化；沼气发酵???型；总产气量；甲烷纯度；COD 　　中图分类号：Q933；TQ920.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）10-2260-04 　　温度是限制低温沼气发展的重要因素，低于20 ℃时沼气发酵效率会显著下降，我国北方年平均气温为1.3 ℃，若在低温季节进行沼气发酵需人为加热保温，增加了运行成本，而使得沼气发酵难以在北方推广。此外，湿发酵沼液量大，处置不当易造成二次污染，若干发酵替代湿发酵不仅利用秸秆解决生物质能转化问题，而且减少其焚烧所带来的空气污染[1]。试验采用不同生境来源的样品，利用微生物对环境适应性及温度对其的选择作用在干、湿发酵中进行低温驯化，比较干、湿发酵优越性并且选育稳定、高效、适宜低温干、湿发酵的产甲烷复合菌系，为低温沼气工程提供试验参数及菌种资源。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 样品来源 样品选择厌氧污泥Y、水稻田污泥S、沼气发酵液Z。 　　1.1.2 底物及试剂 牛粪酸化液：将9 kg干牛粪与9L水在塑料桶里混合均匀，自然酸化待pH降至6时，用KHCO3溶液将其pH调至7，装料时将TS调至8%。 　　未酸化底物：将9 kg干牛粪与3 kg粉碎的秸秆充分混合[2]，加水搅拌均匀，装料时将TS调至20%作为干发酵底物[3]；将TS调至8%作为未酸化物料湿发酵底物。 　　试剂：1/6 K2Cr2O2=0.100 0 mol/L、[（NH4）2Fe（SO4）2·6H2O]=0.1 mol/L、消解液、Ag2SO4-H2SO4催化剂、邻菲罗啉指示剂、掩蔽剂、KHCO3等。 　　1.2 方法 　　1.2.1 干法驯化 将样品Y、S、Z分别接入盛有0.8 kg的干发酵底物（TS为20%）的3 L塑料瓶中，3次重复。密封后放入（19±0.5） ℃生化培养箱中培养；定期测定产气量及CH4含量，将产气量、CH4含量高的培养物继代培养至性能稳定为止。 　　1.2.2 湿法驯化 将样品Y、S、Z分别接入盛有1L牛粪酸化液和1L未酸化物料TS 为8%的3 L玻璃瓶中，3次重复。密封后放入（19±0.5） ℃生化培养箱中培养；定期测定产气量及CH4含量，将产气量、CH4含量高的培养物继代培养至性能稳定为止。 　　1.2.3 产气量与气体成分测定 采用排水法测定产气量；采用GC-14C2010气相色谱进行气体成分分析。 　　1.2.4 统计分析方法 试验数据采用SPSS Statistics-V19.0数据分析软件进行统计分析，采用LSR最小显著极差法进行多重比较。 　　1.2.5 干发酵不同接种量 干发酵中将复合菌系Y按接种量20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%分别接入试验组中，设置3次重复。 　　1.2.6 干发酵COD去除率 取干发酵原料测初始COD，接种25%低温产甲烷复合菌系Y后密封培养，每隔6 d测甲烷浓度并取其发酵物测COD，计算COD去除率，设置3次重复。 　　2 结果与分析 　　2.1 干发酵总产气量动态变化 　　由图1可知，3个样品的总产气量随着传代次数增加而增加。样品Y从第2代起每代总产气量都高于S和Z，第6代时样品Y和Z产气开始稳定，第7代时样品S产气开始稳定。样品Y第8代65 d总产气量为42.60 L，较第1代提高47.4%，产气启动期较第1代提前7 d，产气量优于样品S和Z。 　　2.2 湿法酸化发酵总产气量动态变化 　　如图2所示，湿法酸化发酵复合菌系世代间总产气量变化规律同干法。样品Y从第4代起总产气量都高于S和Z，平均分别提高5.68%和5.53%，样品Y和S在第7代产气开始稳定，样品Z在第