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抗原表位分子印迹膜测量重合炭疽保护性抗原的反应和细分腔Dar-Fu Tai,*,? Ming-Hong Jhang,? Guan-Yu Chen,? Sue-Chen Wang,? Kuo-Hao Lu,? Yu-Der Lee,? and Hsin-Tzu Liu? 东华大学 化学系 清华大学化学工程学院一种分子印迹膜在表位肽石英晶体微天平上的（QCM）芯片上这5个称为线性肽或构象表位的炭疽保护抗原PA83。印迹的结果是与相应的模板亲和，随着基本单体，结合效应进一步亲和力亲和力的肽诱导其相应的分子聚合物（MIP）比分析残留物分子所有表位腔不同的保护性抗原表位的PA83区以及相应的蛋白转换酶Furin裂解片段PA63和PA20，该芯片的QCM反应不同，picomolar的范围内观察保护性抗原片段，从而证明了操作有明确方向表面蛋白一种方法 在机场(PA83, 83 kDa)，致命因子(LF, 90 kDa)，以及水肿因子(LF, 90 kDa)。保护性抗原（PA83），在大多数哺乳动物细胞受体（PA83）PA20和PA63PA63是转换为heptameric环状齐聚物，形成较大的孔隙PA83, PA63,和 PA20都认为是炭疽生物标志物人类炭疽疫苗的活性成分，保护性抗原其晶体结构已被确定。此外，反PA83具有抗体的能力，防止炭疽动物一种新型保护性抗原识别检测系统具有极大的价值一些抗体，应用保护性抗原检测分子印迹聚合物（MIP）已经成功地发展这些线性表位腔（1）蛋白抗原表位丰富，可以通过晶体结构和抗原表位显示映射抗原表位印迹结果表明，空腔作为他们母蛋白结合位点的功能抗原表位腔有足够的弹性蛋白和维护随后附件天然构象蛋白质抗原表位腔能够操纵有明确方向表面蛋白 在制作上比使用组氨酸标容易更便宜我们设计并合成聚合物膜形成几个表位腔，以进一步探讨epitope-cavities和位置表位腔的影响他们能够正确地检测炭疽存在PA83，PA63，PA20实验（中银- L -半胱氨酸）丙烯酸，丙烯酰胺，酪胺，及中银L-组氨酸均来自Sigma - Aldrich公司（圣路易斯，密苏里州）。N - Benzylacrylamide购于兰开斯特（兰开夏郡，英国）来自保护性抗原（PA炭疽）合成（SPPS的探索）用微波合成N -ACR -酪胺酪Acrylation和（N -ACR - L -半胱氨酸- NHBn）2为原料合成（中银- L -半胱氨酸）缓冲为所有实验用的磷酸盐缓冲液（PBS）（20 mM的磷酸二氢钠，pH值7.0）重复性为± 1 HzQCM包括8毫米直径10兆赫的AT切金电极（石英水晶制造磁盘直径4.2毫米）晶体保护性抗原（PA83）及其（PA63和PA20）rPA，由名单生物实验室（坎贝尔，加利福尼亚州）作为商业冻干制剂。中银- L型与甲醇 酯化合成的ACR - L -组氨酸- NHBn作为一种催化剂形成木瓜蛋白酶叔丁氧羰- L -组氨酸甲酯叔丁氧羰- L -组氨酸甲酯转化中银- L -组氨酸与木瓜蛋白酶存在苄NHBn脱保护与三氟乙酸中银集团，其次acrylation合成 ACR - L -组氨酸- NHBn制备印迹聚合物涂层的QC在QCM的磁被浸泡在10 mM，为16小时高效液相色谱级乙腈（n -的ACR - L -半胱氨酸- NHBn），然后用乙腈冲洗彻底无论丙烯酸或的ACR - L -组氨酸- NHBn（55μmol），丙烯酰胺（55μmol）的N - benzylacrylamide，或N -的ACR -酪胺（110μmol），氮，N -二乙烯双丙烯酰胺（22μmol）和3肽μmol在0.3毫升溶液（乙腈混合/ 20，水）1:1） 3次，沉积在上面的等分微升第（n -的ACR - L -半胱氨酸- NHBn）金电极芯片横放20毫升含乙腈瓶（3毫升）紧紧小瓶波长为350 6小时紫外线灯照射该聚合物，一个在金表面形成薄膜，经20 mM的磷酸盐缓冲液（pH值）3-4）洗涤删除模板其次是与甲醇洗和烘干流动注射系统中包含一个高效液相色谱泵（型号L7110，日立，流速）0.1毫升分- 1）家里建流通池，进样阀（型号1106，OMNIFIT）的QCM传感器（蚂蚁的P - Sensor2000，台湾），以及个人电脑该聚合物涂层的QCM是固定的两个O形圈，进入流单元格中插入只有三分之一的QCM接触液体磷酸钠缓冲液（20，pH值7.0）是用于循环，清洗和检测。为了达到平衡，新印芯片很快!未定义的书签，空白，100微升解决方案，包括碱性（pH值9 PBS），中性（蒸馏水）和酸性（5％乙酸蒸馏水），注射到细胞中循环流动从表4的亲和力，PA83显示测量展出超PA63 Kd值略低差异有可能构象变化引起的表位区域和质量差对PA83规模较大，他们必