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银杏叶中黄酮类化合物提取与测定方法研究 　　摘 要 银杏被称为裸子植物的“活化石”，是我国特有植物。其主要药用成分为黄酮类和萜内酯类化合物。我国银杏叶资源占世界资源的3/4以上，但在银杏叶的提取和测定上，还很落后。所以，要更深一步对银杏叶进行研究。本文研究了银杏叶中的黄酮类化合物，包括它的成分、提取方法和测定方法。由于黄酮类化合物具有降血脂、血压和治疗冠心病、心绞痛、慢性肝炎等多种药理及保健作用，因此，对其的研究具有广泛的前景。 　　关键词 银杏叶；黄酮；提取；测定 　　中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1671-7597（2013）15-0116-01 　　1 银杏叶中黄酮类化合物的化学成分 　　黄酮类化合物在银杏叶中含量较高，有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及其苷类，儿茶素类和双黄酮等成分。黄酮类化合物都含有Cl5核，在银杏叶提取物中的含量约占5.91%，目前从银杏叶提取物中已分离的黄酮类化合物有40种。 　　2 银杏叶中黄酮类化合物的提取方法 　　1）有机溶剂提取法主要是使用的溶剂为酮、醇类，后再进行净化。近年来越来越多的被采用。在国内，多采用乙醇作溶剂进行提取，在国外，多用丙酮作溶剂进行提取；银杏叶被溶剂粗提后，再进行精制，国内一般采用树脂吸附的方式进行精制，在国外一般采用有机溶剂萃取的方式精制。 　　2）微波提取法微波具有试剂用量少、加热均匀、提取批量大、选择性好等优点。以微波辐射的方式可加快反应速度。在提取黄酮类化合物上取得很好的效果。 　　3）超临界萃取法具有节能明显，工艺流程简单，萃取的效率高，无有机溶剂残留，产品质量好，对环境无污染等优点。但超临界萃取法使用的设备属高压设备，投资比较大，操作比较困难等缺点，很难应用于大规模的生产。 　　4）酶浸渍萃取法是利用酶反应的高度专一性，将细胞壁的组成成分水解或降解，破坏细胞壁，从而提高有效成分的提取率。且要求酶有极高的活性、温和的反应条件，酶法提取的效果主要取决于酶的种类、用量、酶解时间、温度、酸碱度、物料细度、搅拌等多种因素。 　　5）超声波辅助提取法是利用超声波具有的机械效应，空化效应和热效应，通过增大介质分子的运动速度、增大介质的穿透力来提取生物有效成分。近年来越来越受到广泛重视。超声波提取具有节时、节能、节料、提取率高的特点。 　　6）大孔树脂吸附法因为银杏黄酮具有糖苷链和多酚结构，有一定的亲水性和极性，利于弱极性和极性树脂对其吸附。而非极性树脂吸附黄酮的量偏小。 　　7）细胞和组织培养合成法是在无菌的条件下将组织或细胞置于培养基内，并放在适宜的环境中，进行连续培养而成的细胞、组织或个体。而银杏具有遗传性稳定、有克隆性、筛选方便等特点，这种技术已广泛应用于农业和生物、医药的研究。 　　8）超滤法是以压力为推动力的膜分离技术之一。对水施加一定的压力后。高分子物质胶体物质就由膜所阻止，而水和低分子物质透过滤膜的过程，可较高选择性的分离体系中的各组分，且方法简便，易操作。 　　9）水提取树脂分离法将银杏叶进行预处理，再以热水作溶剂进行浸提，再经树脂柱吸附精制得到。目前此方法的报道很少。 　　3 黄酮类物质的测定方法 　　1）分光光度法多采用芦丁标准品，配制含芦丁的标准液，测定吸光度，绘制标准工作曲线。此法被一些药典所采用，只能粗略估计总的类黄酮，不能对苷元细致地定量、定性，所以测定结果偏高，重复性差，准确度低，但本法具有简单、快速、试剂用量少等优点。 　　2）色谱法。 　　纸色谱法是使用有多孔和强渗透能力的滤纸或纤维素薄膜进行分离测定的方法，但此法分析黄酮选择性比较差。 　　薄层色谱法是将硅胶G、氧化铝等涂在玻璃板上，形成一层薄层，以溶剂为流动相对混合物进行定性或定量的方法；该法与HPLC方法比较无明显优势，因而研究及报道均较少。 　　气相色谱法具有分离效率高、灵敏度高、进样量少、应用范围广等优点；但样品需要预处理，步骤较麻烦；高效液相色谱法测定银杏总黄酮专属性强，灵敏度高，准确度高，己被许多国家采用。 　　超临界CO2萃取色谱法是利用其分离效率高的特点，对样品中黄酮进行分离检测。该法是目前较先进的测定方法，但所需设备大，费用高。 　　高速逆流色谱法是一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，它不需任何固态载体，能避免固相载体表面与样品发生反应而致使样品的被污染、变性、失活和不可逆吸附等不良影响。同时它也具有适用范围广、成本低、快速、回收率高等优点。 　　3）极谱法是通过测定电解过程中所得到的极化电极的电流-电位（或电位-时间）曲线来确定溶液中被测物质浓度的一类电化学分析方法。具有适用范围广、准确度高、选择性好等优点，汞蒸气有毒，须注意通风，检查空气中含汞量。 　　4）滴定法。 　　库仑滴定法与普通滴定法不同