实验十、培养基的制备200903.pptVIP

实验十、培养基的制备 一、目的和要求 1 明确培养基的配制原理 2 通过对牛肉膏蛋白胨培养基等培养基的制备，掌握配制培养 基的方法和步骤 二、实验原理 培养基 人工地将多种营养物质按照各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养物质，用以培养或分离各种微生物。 培养基的物理状态： 固体培养基、半固体培养基、液体培养基。 凝固剂：琼脂 固体培养基：加入琼脂1.5%-2.0%。 半固体培养基：加入琼脂0.2%-0.7%。 已经配制好的培养基必须立即灭菌，以防止其中的微生物生长而消耗营养成分和改变培养基的pH。 三、操作步骤 称量 溶化 定容 调pH 分装：直接分装；培养基分装装置 包装：包扎、做标记（培养基名称、时间，制作人） 灭菌：高压蒸气灭菌锅，121°C，20’ 摆斜面 称量 在烧杯中加入少量的水，按照培养基配方的比例依次 准确地称取药品。 牛肉膏一般可放在称量纸上，然后将称量纸直接放入水 中，经搅拌或稍加热，牛肉膏便会与称量纸分离，此 时取出称量纸。 蛋白胨和琼脂粉称量好后需先用少量冷水调成稀糊状，在 加入上述烧杯中。 注意：称取药品时严防混杂，一把药匙用于一种药品；或称取后，洗净、擦干，再称取另一种药品。瓶盖也不要盖错。 溶化 边加入药品，边用玻璃棒轻轻搅拌，或用微波炉稍 加热使药品完全溶解。 定容 补充其余水分到所需的总体积。 固体培养基：将称好的琼脂放入烧杯中，并加热。 琼脂在96°C时溶解。 注意：加热煮沸时要不断搅拌， 以防琼 脂糊底使烧杯破裂。 调pH 向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH 或1mol/LHCl，并随时用pH试纸测定。 注意：pH值不要调过，因为回调会影响培养基内各离子的浓度。 分装 液体分装：分装高度为试管高度的1/4 固体分装：试管的装量不超过管高的1/5； 三角瓶装量不超量容量的一半。 半固体分装：试管高度的1/3。 牛肉膏蛋白胨培养基配方：（g/1000ml） 牛肉膏 3 蛋白胨 10 NaCl 5 琼脂 15-20 pH 7.4-7.6 * * 在烧杯中先加入少量的水； 牛肉膏放称量纸上，称量后连纸直接放入水中，经搅拌或稍加热，牛肉膏 便会与称量纸分离，此时取出称量纸。 蛋白胨和琼脂粉称量好后需先用少量冷水调成稀糊状，再加入上述烧杯中。 边加入药品，边用玻璃棒轻轻搅拌，或用微波炉稍加热使药品完全溶解。 牛肉膏蛋白胨培养基（500ml/组） 分装试管斜面（2支/人） 三角瓶 （4个/组） 无菌培养皿（4套/人） 枪头（15个/组）