寨卡等蚊虫传播传染病实验室检测策略课件.ppt

病原检测 核酸检测 BSL-2 常规RT-PCR/琼脂糖凝胶电泳 实时荧光定量PCR (TaqMan) 分离病毒BSL-3 细胞培养: Vero, BHK, C6-36, 其他 小鼠 抗体检测 IgM（ELISA、IFA) IgG（ELISA 、IFA) 中和抗体（PRNT,定量分析） 病原检测比较 核酸 IgM抗体 IgG抗体 中和抗体 1. 与其他黄病毒无交叉，一经明确即可确诊2. 低敏感性 3.需要重复，不同基因组位置 1. 最常用急性期感染检测 2. 第一周仅50%出现3. 与其他黄病毒存在一定交叉4. 持续时间长，单独的IgM阳性并不能作为急性诊断标准，尤其是流行区 1. 交叉严重，如JE,SLE 疫苗接种. 2. IgG阴性，IgM阳性提示近期感染 (疑似病例). 3. 无症状的不推荐，不能作为疫苗效果评价4. 恢复期较急性期水平升高意味近期感染了黄病毒或者接种了疫苗 1. 重要鉴别诊断及确诊指标2. 与其他黄病毒有一定交叉，但可以定量比较差异以鉴别3. 恢复期较急性期血清存在4倍及以上增高，具有重要诊断意义 疑似病例检测结果意义 核酸检测-引物序列 市售血清学检测试剂种类 Focus Diagnostics (WNB IgG DxSelect, WNV IgM Capture DxSelect, Cypress, CA) PANBIO Diagnostics (WNV IgM Capture, WNV IgG Indirect, Wind-sor, Australia) InBios International (West Nile Detect IgG Capture ELISA, West Nile Detect IgM Capture ELISA, Seattle, WA). 三、基孔肯雅热 基孔肯雅热（chikungunya fever）:1952年首次在坦桑尼亚证实了基孔肯雅热流行，1956年分离到病毒。 是由基孔肯雅病毒(chikungunya virus, CHIKV)引起，经伊蚊传播，以发热、皮疹及关节疼痛为主要特征的急性传染病。 2010年，广东东莞报告91例疑似病例。 基因结构 通过对E1基因的系统发生分析可将CHIKV分为3个组：第1组包含了全部西非的分离株，第2组是亚洲分离株，第3组为东、中、南部非洲的分离株。 基因结构 CHIKV属于披膜病毒科甲病毒属，为不分节段的正链RNA，直径约70nm，有包膜，含有3个结构蛋白（衣壳蛋白C、包膜蛋白E1和E2）和4个非结构蛋白（nsP1、nsP2、nsP3和nsP4）。长度约为11～12 kb。病毒基因组编码顺序为5’－NS1－NS2－NS3－NS4－C－E3－E2－E1－3’。 实验室检查 实验室检查 四、登革病 重要免疫原 诊断标记 RT-PCR NS1： 膜相关NS1，mNS1 分泌型NS1，sNS1 病毒发病第1-9天出现 血症期必然出现的分子标识物 可高达50μg/mL Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 1、核酸检测（NESTED PCR，Real time PCR） 2、ELISA（NS1抗原，IgM，IgG，IgA） 3、胶体金（ NS1、 IgM，IgG ） 4、C6/36白纹伊蚊卵细胞分离登革热病毒 5、间接免疫荧光试验（IFA）鉴定登革热病毒 6、新生小白鼠分离登革热病毒 实验室检测方法 登革病毒首次感染 7 0 7 14 21 天 IgM ~90天 IgA ~45天 IgG 潜伏期 病毒血症 发热期 急性期 恢复期 病毒分离 核酸检测 NS1抗原检测 IgM抗体检测 病毒中和实验 IgG抗体检测 病毒中和实验 PLoS Negl Trop Dis 5(9): e1309. 登革病毒再次感染 7 0 7 14 21 天 IgM IgA IgG 潜伏期 病毒血症 发热期 急性期 恢复期 病毒分离 核酸检测 NS1抗原检测 IgM、IgG、IgA检测 病毒中和实验 PLoS Negl Trop Dis 5(9): e1309. 合适的时机采用合适的检测方法 检测方法 登革NS1抗原 RT-PCR 病毒分离 登革IgM抗体 登革IgG抗体 发病天数 1-6天 1-5天 1-5天 5天以后 10天以后 确诊标准 检出NS1抗原 检出病毒核酸 检出病毒 检出IgM抗体，双份（间隔期不少于7天）IgM阳转 继发感染出现高水平IgG抗体（捕获法）或滴度4倍升高 世界卫生组织登革防控指南2009 登革实验室检测方法特点 世界卫生组织登革防控指南2009 早期检测宜用PCR、NS1，发病5天后宜采用抗体检测 寨卡病毒、登革病