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山酢浆草根颈试管苗培养研究 　　摘要：为实现栽培、保护野生种质的目的，本研究以山酢浆草的根颈为材料，进行了试管苗的培养和继代繁殖培养、试管苗根茎的扦插和移植研究，建立起根颈试管苗培养技术。结果表明：1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA是试管苗培养和试管苗根茎继代繁殖培养的理想培养基；在温室苗床上试管苗根茎扦插成活率为96%，繁殖速度提高了2.9倍；试管苗移植成活率为98.8%，移植成活的试管苗保持了野生山酢浆草的所有植物学性状。 　　关键词：山酢浆草；试管苗；繁殖 　　中图分类号：S543+.904.3文献标识号：A文章编号：1001-4942（2013）07-0009-03 　　山酢浆草（Oxalis acetosella）又称白花酢浆草、三叶铜钱草等，属于酢浆草科酢浆草属多年生草本植物，在我国黑龙江、吉林及辽宁地区的本溪、凤城和盖州等地都有分布[1]，生长在针叶林、针阔混交林、阔叶林及灌丛下阴湿地。酢浆草含黄酮??、荭草素等成分，全草可作中草药使用，具有活血化瘀、清热解毒、利尿通淋等功效，能治劳伤疼痛、跌打损伤、无名肿毒、麻风、疥癣等疾病[2]。近年来辽宁东部地区的养鸡农民发现，将山酢浆草的干粉作为蛋鸡的饲料添加剂使用，能明显地降低蛋鸡的发病率，提高养殖效益。为此，一个时期以来，辽宁东部地区养鸡农民每年都要数次采收山酢浆草，作为饲料添加剂或者出售，导致山酢浆草的野生资源受到了严重破坏，不仅严重影响其作为饲料添加剂的使用，还使本来分布和数量都很有限的这一药用植物更加稀少。虽然目前已有栽培植物尤其是酢浆草属植物组织培养的研究报道[3～10]，但迄今未有山酢浆草的相关研究报道。为实现栽培、保护野生种质的目的，研究者对其进行了根颈愈伤组织的无性系繁殖研究。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　6月中旬，从本溪灌丛下阴湿地采取生长旺盛的山酢浆草，将具有根颈的根剪下作为试验材料。 　　1.2材料灭菌 　　将试验材料放到500 ml的磨口广口瓶中，用无菌水摇晃洗涤5～10 min，蒸馏水摇晃洗涤5 min左右，移到超净工作台上，用75%的乙醇灭菌约10 s，再用0.1% HgCl2灭菌2 min，无菌水洗涤2次，再用饱和的次氯酸钠溶液灭菌8 min，最后用无菌水洗涤6次，即可获得无菌材料[11]。 　　1.3培养条件 　　光照强度1 500 lx，培养温度22℃，其它培养条件参见六道木嫩芽快速繁殖的研究[12]。 　　1.4试验方法 　　1.4.1根颈试管苗培养把材料上的根颈从无菌材料上切下，接种到以1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT为基本培养基、分别添加0.1、0.2、0.4、0.8 mg/L 2，4-D、NAA、IBA、IAA 4种生长素的培养基上，进行不同种类、不同浓度生长素对根颈试管苗培养影响的试验。试验重复2次，每种培养基接种培养20个根颈。 　　1.4.2试管苗根茎的继代繁殖培养把在1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA培养基上培养的具有生长点的根茎，用无菌手术剪子剪成具有2个生长点的根茎段后，继续接种到该种培养基上，进行试管苗根茎的继代繁殖培养。试验重复2次，每次继代繁殖培育6代，接种200个根茎段。 　　1.4.3试管苗根茎的扦插继代培养繁殖的试管苗从培养瓶中取出，将根茎剪成具有2个生长点的根茎段后，扦插到温室苗床上厚约6 cm的扦插基质（由1/2园土与1/2河沙组成）中，进行试管苗根茎段的扦插试验。移栽后前12 d要保持遮阴、空气相对湿度为85%的生长条件，之后按照温室内正常条件进行管理。试验重复2次，扦插的数量分别为380株和260株。 　　1.4.4根茎扦插试管苗的移植5月上旬，当外界最低温度达到15℃时，把在温室苗床上由根茎扦插成活的试管苗移植到大连郊区水库旁灌丛下的阴湿地上。移植试验一次性完成，共移植605株。移植后，除移植时浇1次透水外不进行其它管理。移植的同时，从本溪挖来20株正常生长的野生山酢浆草定植于试管苗旁作为对照。 　　2结果及分析 　　2.1不同种类、不同浓度生长素对试管苗培养的影响 　　培养到60 d时观察统计，结果见表1。只在添加不同浓度NAA和IAA的培养基上有试管苗形成，且只在添加0.2、0.4 mg/L IAA的 2种培养基上有根茎形成。从试管苗、根茎的生长率、长势 4个方面看，添加0.4 mg/L IAA的培养基生长效果最好。在该种培养基上培养9 d时，有培养材料在根颈下部长出白色的根，上部长出叶片，生长成试管苗；之后，随着试管苗的生长率不断增加，又有试管苗会相继生长出根茎；培养到60 d时，不仅试管苗生长旺盛，且所有的试管苗都长出根茎，根茎