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内生菌根菌对蓝莓抗氧化成分含量影响 　　摘要：分析内生菌根菌对蓝莓（Semen trigonellae）鲜果中抗氧化成分的影响。以北陆蓝莓为材料，对接种和未接种菌根菌蓝莓鲜果中具有抗氧化作用的花青素、鞣花酸含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性变化进行了研究。结果表明，蓝莓接种菌根菌后鞣花酸、花青素、SOD活性总体呈上升趋势，比未接种分别高31.3%，125.0%和22.8%。 　　关键词：蓝莓（Semen trigonellae）；内生菌根菌；鞣花酸；花青素；超氧化物歧化酶（SOD） 　　中图分类号：S182 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）10-2408-03 　　蓝莓（Semen trigonellae）又称蓝浆果，属杜鹃花科（Ericaceae）越桔属（Vaccinium）丛生灌木，其果实深蓝色，果肉细腻，鲜食与加工皆宜。蓝莓富含花青素和鞣花酸，抗氧化能力强，被联合国粮农组织列为人类5大健康食品之一[1]。蓝莓鲜果中的花青素属于多酚类物质，其含量位列所有蔬菜和水果之首[2]。研究表明，花青素是天然水溶性抗氧化剂，具有清除自由基、延缓衰老、降低心血管疾病发病率、改善老年痴呆、抑制癌细胞生长等作用。鞣花酸也是广泛存在于各种植物中天然多酚组分，属天然抗氧化剂，具有抗衰老、增强肌体免疫力，抑制癌细胞生长等作用[3]。超氧化物歧化酶（SOD）是生物机体抗氧化酶系统重要的抗氧化酶之一，是生物体内重要的超氧阴离子自由基清除剂，能专一地清除生物氧化中产生的超氧阴离子自由基，防止脂质的过氧化反应，延缓机体衰老等作用。蓝莓菌根菌（晶粒鬼伞，Coprinus micaceus）是辽宁省农业科学院从长白山野生越橘中筛选的内生菌根菌，可促进蓝莓根部生长，并能增强蓝莓的抗逆性。本研究通过在蓝莓植株根部接种菌根菌后，分析蓝莓鲜果中的花青素和鞣花酸含量变化以及SOD活性变化，旨在揭示菌根菌对蓝莓鲜果抗氧化能力的影响，为蓝莓菌根菌的应用提供借鉴和参考。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　蓝莓菌根菌由辽宁省农业科学院微生物工程中心提供。 　　北陆蓝莓经接种菌根菌，收集成熟果实作为处理样品；以未接种植株的鲜果为对照样品。 　　1.2 方法 　　1.2.1 鞣花酸含量的测定 参照郭金彩[4]报道方法：色谱柱Agilent TC-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），流动相为乙腈∶水∶磷酸=15∶84.5∶0.5（体积比），检测波长为254 nm，流速1 mL/min，柱温设为室温。取3批蓝莓样品，按上述色谱条件以外标法定量分析。 　　1.2.2 花青素含量的测定 称取1 g蓝莓鲜果，捣碎，加入80%（体积分数）乙醇-水（pH=3）溶液8 mL，避光浸提30 min后，以8 000 r/min离心10 min，收集上清液并稀释10倍，平行测定OD520 nm 3次，取平均值。 　　1.2.3 SOD活性的测定 以氮蓝四唑（NBT）法测定，以抑制NBT光化还原反应的50%为一个酶活性单位，以（U）表示。 　　2 结果与分析 　　2.1 接种菌根菌对蓝莓鲜果鞣花酸含量的影响 　　2.1.1 鞣花酸标准曲线的绘制 以鞣花酸峰面积（μV·s）为纵坐标，以鞣花酸进样质量（μg）为横坐标，作图（图1），得鞣花酸回归方程为y=10 395x+40.69，R2=0.999 5（n=6），鞣花酸在0.136 0～2.175 4 μg范围内呈良好线性关系。 　　2.1.2 蓝莓中鞣花酸的含量测定 鞣花酸标准品、未接菌根菌和接种菌根菌的蓝莓鲜果鞣花酸色谱图见图2。由图2可知，鞣花酸保留时间为13.85 min，未见干扰峰。通过外标法测定蓝莓鲜果中鞣花酸含量见表1，其中未接种菌根菌的蓝莓鲜果鞣花酸含量为2.389 2 mg/g，接种蓝莓菌根菌的蓝莓鲜果鞣花酸含量为3.136 8 mg/g，其含量高于对照样品31.3%。 　　2.2 接种菌根菌对蓝莓鲜果花青素含量的影响 　　采用分光光度计法测定蓝莓鲜果中花青素含量，结果见图3。未接种菌根菌的蓝莓鲜果花青素OD520 nm为0.56，接种菌根菌后蓝莓鲜果中花青素OD520 nm为1.26，含量比未接种菌根菌的高125.0%。花青素为植物次级代谢产物，基本结构单元是2-苯基苯并吡喃型阳离子，即花色基元。现已知的花青素有20多种，又称花色素，影响花青素形成的因素有pH值[5，6]、温度[7，8]、光诱导[9，10]等。蓝莓接种菌根菌对花青素形成的影响还未见报道。 　　2.3 接种菌根菌对蓝莓SOD活性的影响 　　SOD普遍存在于动植物与微生物体内，作为生物机体重要的抗氧化酶，是生物体内重要的超氧阴离子自由基清除剂，能专一地清除生物氧化中产生的超氧阴离子自由基，有