发酵工程 第五章5.pptVIP

第三节 发酵条件及其选择 发酵条件：影响发酵水平的因素 发酵过程不同阶段有不同的条件 生长为主阶段：细胞浓度最高以前阶段 产物生成为主阶段 非生长偶联型两阶段容易划分 一. 营养物的影响和选择 1. 营养物种类对发酵的影响 对菌体生长和产物形成都有影响 有些半乳糖苷可使大肠杆菌?-半乳糖苷酶的产量增加1000倍 用甘露糖代替可阻遏碳源半乳糖，可使有的菌株产生的纤维素酶增加1500倍 对发酵产物种类的影响主要是通过对酶的诱导和降解物阻遏的解除实现的 枯草杆菌既产淀粉酶，又产蛋白酶，提供葡萄糖，只产生蛋白酶 对发酵产物比例的影响 ?-氨基丁酸作前体，可使Cyclosporin有效组分A由77%提高到100% 加入0.01?g/ml钴离子，促进甲基化辅酶维生素B12的形成，使库马霉素有效组分提高 2. 营养物浓度对发酵的影响 对生成量和组成都有影响 黑曲霉柠檬酸发酵 蔗糖浓度15%~18%，蔗糖同化率97% 蔗糖浓度20%，只同化92% 蔗糖浓度低于10%，产柠檬酸少，积累草酸 蔗糖浓度低于2.5%，不产柠檬酸 营养物浓度小于10Ks(营养物饱和常数)时，?是S的函数，当S10Ks， ?接近?max，当?成为?max， S的增加不再影响? 在生长偶联型发酵中，趋向qpm与?max的变化一致 当?趋向0时（？？）qp??? ?随S浓度增加而加大，达到?max时不再受S的影响 当S下降时， ?也随之下降 在部分生长偶联型发酵中，产物生成后于生长， 当?趋向?max ，然后趋向0时，qp仍在增加直到qpm qp与营养物浓度饱和值无关 即营养物浓度不饱和的限制作用只影响?，而不影响qp 稳定期前营养物浓度控制的浓度保持最大?，稳定期内营养物浓度控制产物形成最大浓度 在产物生成阶段，菌体不再以几何级数增加，营养物主要用以转化为产物 营养物不足，产物形成少 营养物浓度过高，酶达到饱和，也不会增加产物形成量 营养物也影响代谢调节 3. 营养物比例对发酵的影响 影响菌体按比例、均匀地吸收营养物和环境pH的稳定 影响菌体生长，影响产物量和组成 棒杆菌生产谷氨酸 控制好碳氮比 NH4+过量，菌体增殖阶段会抑制菌体生长，产酸阶段Glu会受谷氨酰胺合成酶作用转化为Gln NH4+不足，?-酮戊二酸积累，引起反馈调节 4. 发酵过程中营养条件的选择 1）种类的选择 生长阶段：营养物要全面 产物生成阶段：给予发酵所需的各种营养，前体、促进剂 混合氮源和混合碳源 2）比例的选择 根据培养基化学组成和菌体需要 根据动力学原理进行优化 根据营养物特性进行调整 碳氮比 3）营养物浓度的选择 二. 溶解氧浓度的影响和选择 1. 溶解氧浓度对发酵的影响 在发酵过程的生长为主阶段，溶解氧浓度下降时比生长速率下降 在发酵过程的产物生成阶段，溶解氧消耗速率变化，取决于营养物的转化率、生长的需要、细胞活动维持的需要 2. 发酵过程中溶解氧浓度的选择 不管那种类型的发酵，生长阶段和产物形成阶段耗氧量均不同 耗氧量取决于菌数和呼吸强度 对数期：比生长速率？呼吸强度？ 稳定期： 为了得到高的溶解氧浓度而增加搅拌转速也会带来一些弊病 三. 温度的影响和选择 1. 温度对发酵的影响 影响产物生成量 黑曲霉生长最适温度33-37C，积累柠檬酸的最适温度在32C 温度影响合成方向 金色链霉菌在低于30C时合成链霉素，温度到达35C时，只产四环素 2. 发酵过程中温度的变化 影响温度的因素有 生物热：生物氧化过程 搅拌热：液体之间、液体-设备之间摩擦产生 蒸发热：通气使发酵液水分蒸发，由蒸发带走的热 辐射热：罐内外存在温度差 发酵热，各种热的代数和 3. 发酵过程中温度的选择 非丝状菌发酵，产物生成速率最大值的时期都在对数期后 生长为主阶段的最适温度是使比生长速率达到最大值的温度 产物生成为主时的最适温度是使比产物生成率达到最大的温度 青霉素产生菌：菌体生长是30 C，合成青霉素最适温度24.7 C 四. 酸碱度的影响和选择 1. 酸碱度对发酵的影响 改变基质代谢速率 改变代谢途径及细胞结构 黑曲霉发酵柠檬酸，pH 3.0以下积累柠檬酸，pH 3.0以上积累草酸，pH5.0容易积累葡萄糖酸 青霉素产生菌发酵时pH6.5-6.8，pH超过7时，膨胀菌丝增多，细胞结构改变 2. 发酵过程中pH变化 糖和脂在通气充足时，完全氧化，产生CO2和H2O 通气不足时，氧化不完全，产生有机酸或其它中间产物，使pH下降 氮源被同化，pH也会变化 生理酸性盐 生理碱性盐 碳氮比高，发酵液酸性 碳氮比低，发酵液倾向中性或碱性 3. 发酵过程中pH的选择 生长为主阶段 产物生成为主阶段 有时需要兼顾 柠檬酸发酵过