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两种粉虱Hsp60基因克隆与表达 　　摘要：以近缘昆虫Hsp60基因保守区域设计兼并引物，PCR扩增烟粉虱（Bemisia tabaci）地中海（MED）隐种与温室白粉虱（Trialeurodes vaporariorum）Hsp60基因cDNA，并检测了Hsp60基因受温度影响的表达情况。结果表明，烟粉虱MED隐种Hsp60基因cDNA的开放性阅读框长1 821 bp， 编码607个氨基酸；温室白粉虱Hsp60基因cDNA的开放性阅读框长1 788 bp， 编码596个氨基酸，Hsp60基因在昆虫纲低级阶元水平和高级阶元水平系统进化上能得到一个较理想结果。温室白粉虱Hsp60基因表达量受温度影响显著（P0.05）。 　　关键词：烟粉虱（Bemisia tabaci）地中海（MED）隐种；温室白粉虱（Trialeurodes vaporariorum）；Hsp60基因；耐热性 　　中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）21-5339-03 　　Cloning and Expression of Hsp60 Gene in Two Whitefly 　　GUO Li-li，XIAO Lin-yun，YU Hao，WANG Yun-bing 　　（School of Resource and Environment Science，Henan Institute of Science and Technology， Xinxiang 453003， Henan， China） 　　Abstract： Primers were designed based on the reported sequences of conservative regions of Hsp60 gene family in other insects， and the fragments isolated from the two whitefly were amplified by PCR and the full-length cDNA sequences were obtained by sequence assembly. The full-length cDNA of Hsp60 of the two whitefly contained 1 821 and 1 788 bp， open reading frame（ORF） encoded 607 and 596 amino acids， respectively. Meanwhile， the results showed that the Hsp60 presented good phylogenetic informativeness at both low and high taxonomic levels in insect. Trialeurodes vaporariorum Hsp60 gene expression was found significantly affected by temperature（P0.05）. 　　Key words： Bemisia tabaci MED； Trialeurodes vaporaiorum； Hsp60 gene；heat resistance 　　目前，已发现的导致水生动物感染水霉病的真菌有水霉属（Saprolegnia）、绵霉属（Achlya）、细囊霉属（Leptolegnia）、丝囊霉属（Aphanomyces）、腐霉属（Pythium）和异霉属（Allomyces）的13 种真菌，其中以水霉、绵霉、细囊霉和丝囊霉最为常见，也最为容易导致水霉病的大面积蔓延和流行。传统的真菌病原菌分类主要根据其感染部位、体外培养的形态、生理生化指标以及有性生殖过程的形态特征等。但这些鉴定方法主观性强、程序繁琐、重复性???、周期很长，且形态特征易受环境等因素的影响，加上稳定性和分类能力上受到很多限制，因此往往很难能鉴定到种。随着对卵菌纲生物的形态学、细胞学、生理学和分子生物学等方面的深入研究，推动了水霉菌分类鉴定的发展。在基础分子生物学和临床医学的研究中，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）技术被认为是应用最为广泛的方法之一。聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离、鉴定及其结构与功能的分析，该方法操作简便、快捷、较为常用，可为不同水霉菌菌株的分类提供技术手段[1]。 　　研究表明外膜蛋白是真菌外膜中的蛋白成分，外膜蛋白结构相对稳定，遗传突变性小，且种间差异明显，因此外膜蛋白常用于研究细菌性和真菌性病原菌株的流行病学特征。因此，本研究对水霉菌外膜蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，比