贵州地方火龙果芽变种质DNA指纹图谱及遗传多样性ISSR分析.docVIP

贵州地方火龙果芽变种质DNA指纹图谱及遗传多样性ISSR分析 　　摘 要：【目的】为了构建火龙果芽变种质的DNA指纹图谱，并揭示种质间的遗传关系，【方法】以贵州近几年选育的一些优良火龙果种质为试材，采用ISSR标记技术和NTSYS 2.01软件对这些新种质及其原始品种进行分析。【结果】利用筛选出的52条引物进行PCR扩增，共扩增出364个清晰、重复性好的标记，其中215个（60%）为多态性标记。M08、845和881 等3个引物扩增出的标记能将22份种质区分开来。采用NTSYS 2.01软件计算，供试种质间的相似性系数为0.70～0.96，平均0.81，其中红肉种质间平均值为0.82，白肉为0.89。UPGMA聚类分析显示，在相似系数0.9处可将供试材料分为11类，其中7份分别各自聚类（红肉占86%）。【结论】火龙果体细胞变异率较高，且红肉品种高于白肉品种，通过芽变选种能有效地实现遗传改良。 　　关键词：火龙果； 贵州； ISSR； 遗传多样性； DNA指纹图谱 　　中图分类号：S667.9 文献标志码：A 文章编号：1009-9980？穴2013？雪04-0573-05 　　火龙果（Hylocereus undatus）为仙人掌科量天尺属（Hylocereus）的果用栽培植物，原产于巴西、墨西哥等中美洲热带沙漠地区[1]，目前在我国台湾及华南地区有一定规模的种植[2]。贵州属南亚热带和中亚热带气候，早在2000年就开始引种栽培火龙果[3]，近年来通过芽变育种从红龙果（红肉）和白玉龙（白肉）两个品种中选出22个优良种质。分子标记已广泛应用于果树种质的遗传多样性分析。ISSR（inter-simple sequence repeat）是一种新型的DNA标记，它结合了RAPD和SSR的优点，已成为果树种质遗传关系研究的主要方法[4-5]。迄今，涉及火龙果分子标记的报道较少[6]，本文拟利用ISSR标记构建贵州近年选育的火龙果芽变新种质的DNA指纹图谱，并分析其遗传关系，为贵州火龙果种质的保护和遗传改良提供参考。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.2 DNA的提取及检测 　　1.3 PCR扩增及检测 　　1.4 数据处理及分析 　　每个引物的扩增反应设3次重复。检测结果显示，绝大部分带型可重复，极少数不能重复的谱带统计时忽略不计。统计谱带时按“引物编号-片段长度”进行记录，建立数据库，并分别用NTSYS 2.01软件与UPGMA法进行其相似性系数的计算和遗传关系树状图的构建。 　　2 结果与分析 　　2.1 ISSR标记的多态性分析 　　2.2 DNA指纹图谱 　　2.3 遗传关系和聚类分析 　　3 讨 论 　　3.1 火龙果品种鉴定和指纹图谱的构建 　　火龙果没有叶片，植株形态标记很少，与其他果树相比单从形态上更不易区分。分子标记能客观地反映其不同种质之间的基因组差异，不受取样部位和时间等因素的影响，是一种简单有效的方法。Wolfe 等[6]研究证明，ISSR分子标记能灵敏地揭示遗传关系十分相近个体间的差异。此外，Moreno等[7]研究证明，由于ISSR引物序列较长（16～25 bp），PCR扩增的退火温度较高，其扩增结果的重演性较高。Junqueira等[8]利用RAPD标记对16份火龙果种质进行遗传多样性分析，结果表明来自相同品种的不同种质其遗传差异性也较大，并认为分子标记技术在遗传育种中至关重要。相对于其他分子标记，ISSR具有成本较低、操作简便、重复性强等优势[9]。迄今，利用分子标记鉴别火龙果品种和构建指纹图谱的报道相对较少。本文利用52条ISSR引物对22个贵州火龙果种质进行遗传关系分析，共扩增出364条谱带，215条具有多态性，多态性比率（60%）高于Junqueira等[8]应用RAPD标记分析火龙果资源的研究结果。 　　22份种质的DNA指纹图谱显示，3份抗逆性种质的DNA在890-625处共同缺失。20号在引物825、827、841、848和862中的共获得5个特征性标记；21号在M03、813和835等9条引物中共获得17个特征标记，22号在865-1000处获得特征性标记，且这23个特征标记除825-375外，均为阴性标记。这说明ISSR可用于火龙果种质鉴别和指纹图谱构建。同时，这也表明火龙果抗逆性种质的突变类型可能是缺失型突变，但这些缺失片段是否真与其抗逆性有关，还有待进一步研究。 　　3.2 火龙果种质间的遗传关系 　　本文通过ISSR技术对22份火龙果材料进行遗传关系分析，结果表明，相同肉色的火龙果资源基本聚为一类。这与Grimaldo-Juárez等[10]的对红、白、黄和紫红四种不同肉色的21份火龙果资源的形态特征和生理生化指标的研究结果一致