导论生物化学2.pptxVIP

生物技术的发展历程（一）原始生物技术——以非纯种微生物自然发酵工艺为标志。（二）近代生物技术——以纯种微生物发酵工业出现为标志。（三）现代生物技术——以基因工程诞生为标志。近代生物技术1857年，Pasteur L发现发酵过程是由微生物作用的结果1860年，Pasteur L单一霉菌纯粹培养技术1878年，啤酒酵母单一培养技术1881年，细菌的纯粹培养技术1929年，抗生素盘尼西林的发现1946年，用细菌生产出氨基酸近代生物技术1952年，用微生物转化荷尔蒙获得成功1953年，Watson和Crick提出了DNA双螺旋结构1957年，从大肠杆菌中发现DNA聚合酶I1967年，第一次发现DNA连接酶1970 年，发现逆转录现象。克利克提出完整的中心法则。 DNA双螺旋模型的提出詹姆士 沃森(1928-) 美国生物学家弗朗西斯 克里克(1916-2004) 英国生物物理学家1953年沃森、克里克在英国生物学家莫里斯 威尔金斯和罗莎琳德 富兰克林(女)等人研究成果的基础上，首先提出了DNA的双螺旋结构模型，于1962年获诺贝尔奖。现代生物技术1970年，Smith，Wilcox和Kelley分离出第一种限制性核酸内切酶1972年，获得第一个重组DNA分子1973年，完成第一例细菌基因克隆——标志基因工程的诞生1981年，获得转基因小鼠现代生物技术1985年，Kary B.Mullis发明多聚酶链反应(PCR)技术。1996年7月5日，第一个用成年体细胞克隆产生的哺乳动物——绵羊多莉诞生1997年，Gordon等人在转基因小鼠乳汁中得到人组织型纤维蛋白溶酶原激活因子（tPA）2000年6月26日公布人类基因组工作草图什么是生物工程 生物工程是生物技术的总称，是对生命有机体在分子水平、细胞水平、组织水平、个体水平进行不同层次的创造性设计和改造，使之能定向组建具有特定性状的新物种或新品系，从而造福人类的现代应用技术.生物工程的四大体系基因工程细胞工程酶工程发酵工程基因工程定义将不同生物的外源DNA(基因）插入到载体分子上，形成“杂种”DNA分子，导入受体细胞中扩增和表达 .基因工程操作的工具将目的基因片断从受体细胞内提取，需要基因的剪刀——限制性核酸内切酶。将目的基因与质粒DNA连接，需要基因的针线——DNA连接酶。将目的基因运入大肠杆菌，需要基因的运输工具——运载体。限制性内切酶生物工程中最重要的工具酶，主要从原核生物中提取；它能识别双链DNA分子中的特异性核苷酸序列，使它在特定的位点水解.限制性内切酶G A A T T CC T T A A GEcoR I识别序列：并做如下切割：5? ······ N N N N G A A T T C N N N ······ 3 ?3 ? ······N N N N C T T A A G N N N ······ 5 ?5 ? ······ N N N N G A A T T C N N N ······ 3 ?3 ? ······ N N N N C T T A A G N N N ······ 5 ?载 体 携带外源基因进入受体细胞的工具 包括：质粒载体 噬菌体载体 复合载体 病毒载体质粒质粒是能自主复制的双链环状DNA分子质 粒标记基因，便于进行检测噬菌体载体一种细菌病毒，可作为克隆载体优点：可以在体外包装产生感染性很高的噬菌体颗粒复合载体科斯质粒是一种人工构建的含有λ噬菌体粘性末端和质粒复制子的杂种质粒，由λDNA cos区约20到几百个碱基片段与质粒重组构造而成。（体外包装只识别粘性末端附近的一小段顺序，35-53kb）病毒载体 病毒载体是一类真核载体，能把基因引入到真核细胞中，并在其中被表达，因此是研究真核细胞表达及调控的有力工具；如：腺病毒、乳头瘤病毒、疱疹病毒等.基因工程的基本过程步骤一 —获得DNA片段，取得目的基因步骤二 — DNA片段和载体DNA在体外连接步骤三 — 将重组的DNA引入宿主细胞转化转染转导显微注射基因工程的基本过程基因工程的基本过程步骤四 — 选择、筛选从大量携带重组体DNA的宿主细胞中分离出携带目的基因的细胞基因工程的基本过程放射自显影硝酸纤维薄膜与探针杂交胶片选择克隆薄膜核酸杂交法基因工程的基本过程步骤五 — 培养、观察看新基因能否在新细胞中“定居”下来，能否复制自己稳定传代，能不能产生表达作用，指导蛋白的合成.基因工程的基本过程抽取DNA切下鼠DNA切开质粒DNA重组DNA技术混合、连接 将质粒导入宿主细胞基因工程的基本过程重组DNA技术培养基中加抗生素培养裂解细胞释放DNA分子杂交分离