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疟原虫检验技术 -血片制作、染色及疟原虫形态鉴别;寄生人体的四种疟原虫;内容提纲;血片制作;;标准的疟疾厚薄血膜片; ;血片制作影响因素;血片染色 ;吉氏染液(原液)的配置;血片的染色;血片染色;操作1 （快染） 量筒内量2ml缓冲液(PBSPH7.0) 或净水，直接滴加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血膜上，染色10min，清水缓缓冲洗，晾干（血膜朝内面）镜检。 操作2 (慢染) 量筒内量2ml缓冲液或净水， 再滴加吉氏原液4滴，混匀，滴入待染标本上，染色30min。清水缓缓冲洗，晾干镜检。 ;将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入3%吉氏染 液（3毫升吉氏染色液加缓冲液或净水97毫升，混匀）浸没血片，染色30分钟。 （如染液稀释液不合标准时，得酌情增减染色时间和浓度），然后用清水轻轻将染液漂洗干净，将染色片插于晾干板上晾干，包装，待镜检。 ;厚血膜溶血染色;质量好的染色 显微镜下核呈红色,胞浆呈蓝色，薄血膜平整，红细胞单层排列 如果血片偏红,说明染液偏酸性 如果血片偏蓝,说明染液偏硷性;配置完吉氏原液时必须过滤除去杂质颗粒，有助于提高镜检质量； 染液稀释后使用时间：原液必须临用时稀释，随配随用； 染液的稀释浓度； 染色时间。;用水过酸，可致感染的RBC上的点彩染不出来； 用水过碱，则使薄血膜上的RBC染成灰蓝色，致使R的胞浆难以辨论。;固定薄血膜时不要将甲醇触碰到厚血膜； 血膜在制备后应尽量能在当天染色，一般夏天不超过48小时，冬天也不能超过72小时,放置时间越久，厚血膜越不易脱血，染色效果也差。 ;疟原虫镜检;●当前分子生物学、血清学技术快速发展,但是厚薄血片的检查仍被认为是不可替 代的确诊疟疾的 “金标准” ●显微镜检查是唯一可查到原虫实体并鉴别4种人体疟原虫 ;疟原虫厚、薄血膜镜检优缺点;疟原虫密度计算;白细胞原虫密度计数法;白细胞原虫密度计数法;× 不需要计数的视野;白细胞疟原虫计数法;用厚血膜每个视野中所观察到疟原虫的平均数粗略地估算出疟原虫密度。此方法将密度分为6级： 1.全厚血膜查见疟原虫数在10个以内，记录实际数字 2.全厚血膜??见疟原虫数在10个以上，但平均每个视野不到1个虫，记录“少” 3.平均每个视野1～5个虫，记录“＋” 4.平均每个视野6 ～ 10个虫，记录“++” 5.平均每个视野11 ～ 100个虫，记录“+++ ” 6.平均每个视野100个虫以上，记录“++++ ”。 如：Pv R+T++S5G少 这种方法简便，缺点是计数的疟原虫数受血膜厚薄影响，只能定性，不宜作定量分析。;如何确定疟原虫血片为阴性;人体四种疟原虫的分布;感染人的疟原虫有四种: ;恶性疟 P.falciparum;间日疟 P.vivax ;三日疟 P.malariae ; ;血细胞;红细胞;血小板; 各种血细胞模式图 1.红细胞  2.嗜酸性粒细胞 3.嗜碱性粒细胞 4.中性粒细胞  5.淋巴细胞  6.单核细胞  7.血小板 ;疟原虫的基本形态特征;疟色素：不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异，疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。 间日疟原虫：呈短棒状，黄褐色； 恶性疟原虫：呈细砂状，黑褐色； 三日疟原虫：呈砂粒状，深褐色； 卵形疟原虫：与间日疟原虫相似。 ;;;21. A member of the UN forces in East Timor. Presented with high temperature. ;;;2. Intermittent fever; arrived from India 2 months ago. ;;;;18. Recent trip to Southern India- headaches and vaguely unwell. ;类型 ;混合感染的鉴别;厚血膜中容易被误认为疟原虫的物质;;;4. Unspecified overseas travel. Presented with temperature 38.4C ;3. History of round the world safari including S. America, Asia and Africa. General malaise. ; 谢 谢！