HPLC—DAD—ELSD指纹图谱化学模式识别用于黄芪质量评价.docVIP

HPLC—DAD—ELSD指纹图谱化学模式识别用于黄芪质量评价 　　[摘要] 目的：建立黄芪药材的HPLC-DAD-ELSD色谱指纹图谱，采用相似度计算和化学模式识别的方法评价黄芪药材质量。方法：采用HPLC-DAD-ELSD串联技术，以Agilent Zorbax ODS C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），乙腈-0.2%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱，流速0.8 mL· min-1，柱温25 ℃，进样量10 μL，检测波长280 nm；ELSD汽化室温度110 ℃，氮气流速3.0 L· min-1。并对黄芪药材指纹图谱进行相似度计算和化学模式识别分析。结果：黄芪药材色谱指纹图谱测定方法稳定性、精密度和重复性良好，以18批黄芪药材建立指纹图谱共有模式，黄芪药材相似度均达到0.83，模式识别分析结果与其一致。结论：指纹图谱结合化学模式识别分析技术可以有效区分黄芪药材及其相关样品，可用于黄芪药材的质量评价，为药材的全面质量控制提供科学依据。 　　[关键词]黄芪；指纹图谱；HPLC-DAD-ELSD；化学模式识别 　　黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.） Bge var. mongholicus（Bge.） Hsiao 或膜荚黄芪A. membranaceus（Fisch.） Bge.的干燥根[1]。市场上黄芪用药量大，但市售黄芪药材质量良莠不齐，严重影响饮片及制剂的临床疗效。黄芪中的化学成分主要有黄酮类、皂苷类和多糖等，都具有比较明显的药理作用[2-4]。为了更加科学地控制黄芪药材的质量，建立黄芪药材多成分综合评价体系是非常必要的，而指纹图谱是评价中药的有效手段之一。中药指纹图谱具有整体性和模糊性，而且相当复杂，如果单用人工分析方法不仅费时费力，而且也受到一定的主观因素影响；此外，宏量色谱数据的处理用直观的方法几乎是不可能的，而化学计量学的飞速发展，为人们评价不同的复杂系统提供了很多有效方法[5-6]。目前对黄芪的指纹图谱研究主要是指纹图谱方法的建立[7-9]，缺少对黄芪指纹图谱整体性和模糊性的合理评价研究。本研究通过建立黄芪药材HPLC-DAD-ELSD指纹图谱，依据8个特征参数，运用模式识别技术如聚类分析和主成分分析法，对18个不同来源的黄芪指纹图谱的8个多维多息特征参数进行数据挖掘，旨在对黄芪指纹图谱整体性和模糊性的合理定量评价提供理论参考和实践探索。 　　1材料 　　Agilent 1100 Series 高效液相色谱仪，配置高压二元梯度泵、自动进样系统、柱温箱、在线真空脱气机、DAD检测器及化学工作站；Alltech-ELSD 2000检测器；Satorius电子分析天平。 　　乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。黄芪样品1-13来源于GAP试验基地并经广州中一药业有限公司陈伟波工程师鉴定为蒙古黄芪的干燥根；样品14，15购自市场，疑似伪品，基原未知；样品16-18经陈伟波工程师鉴定为膜荚黄芪药材。 　　2方法与结果 　　2.1色谱条件 　　Agilent Zorbax ODS C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相0.2%甲酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱，0～15 min，10%～25%B，15～20 min，25%B，20～35 min，25%～32%B，35～40 min，32%～45%B，40～50 min，45%B，50～65 min，45%～65%B，65～75 min，65%～85%B，流速0.8 mL· min-1； 柱温25 ℃；进样量10 μL；检测波长280 nm。ELSD汽化室温度110 ℃，氮气流速3.0 L· min-1。 　　2.2供试品溶液的制备 　　黄芪药材粉碎，过40目筛。精密称量粉末2.0 g到圆底烧瓶中，加甲醇50 mL，回流提取2 h。过滤，滤液蒸干，残渣用甲醇转移到10 mL量瓶中，甲醇定容，摇匀。过0.45 μm孔径滤膜。 　　2.3方法学考察 　　2.3.1精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样5次，其主要共有峰相对保留时间的RSD均小于2.0%，相对峰面积RSD均小于3.0%，表明仪器精密度良好。 　　2.3.2稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，24 h检测，其相对保留时间稳定，主要共有峰相对保留时间、相对峰面积的RSD均小于3.0%。结果表明供试品溶液在24 h内基本稳定。 　　2.3.3重复性试验 取同一批号药材，按2.2项下方法分别制备供试品溶液5份，进行检测，考察方法的重复性。结果表明，主要共有峰相对保留时间的RSD均小于2.0%，相对峰面积RSD均小于3.0%，方法的重复性良好。 　　2.4指纹图谱的建立