HPLC―TOF―MS对中药石见穿化学成分快速鉴别.docVIP

HPLC―TOF―MS对中药石见穿化学成分快速鉴别 　　[摘要] 运用高效液相-高分辨飞行时间质谱（HPLC-TOF-MS）技术对中药石见穿化学成分进行了快速鉴别。色谱分离采用SHISEIDO MG C18（3.0 mm×100 mm，3 μm）色谱柱；流动相为乙腈（A）和水（含0.1%甲酸，B），梯度洗脱，A相比例随时间的变化：10%～90 %（0～33 min），90%（33～40 min）；柱温25 ℃；流速0.6 mL?min-1，柱后分流比为2∶1。质谱定性采用飞行时间质谱，电喷雾离子源（ESI），正离子模式，扫描范围m/z 100～1 000。最后，一次性鉴别出石见穿中28种的化学成分。该研究建立了一种基于HPLC-TOF-MS技术对石见穿中的化学成分进行快速鉴别的方法，为中药石见穿的质量控制及体内的深入研究奠定了基础。 　　[关键词]石见穿；化学成分；鉴别；飞行时间质谱 　　石见穿为唇形科植物华鼠尾草Salvia chinensis Beth.的干燥地上部分，广泛分布于江苏、安徽、江西、湖北、湖南、广东、广西、四川、云南等地，其性凉，味微苦、辛、平，归胃、肝、肺经[1]。临床研究表明[2-3]，石见穿治疗肝炎、癌症及妇科疾病疗效显著，这与其所含特有的化学成分相关，石见穿亦为本院抗癌基本方“清肝散结颗粒”的君药成分，明确石见穿的化学成分对于药材的质量控制及临床应用具有重要意义。到目前为止，对石见穿中化学成分分析以传统的植物化学分离提取的方法居多[4-8]。HPLC与TOF-MS串联技术对于中药复杂体系中化学成分分析和鉴定非常有效[9-10]，它可在短时间获得化合物的准确相对分子质量，通过比对已建立的已知化学成分数据库对被测成分进行快速分析鉴别，相比于传统的中药分离手段具有显著的优越性。本研究运用HPLC-TOF-MS技术快速鉴别出石见穿中28种化学成分，是国内首次报道的运用高效液相与TOF-MS联用技术对石见穿中化学成分的定性分析和鉴别。 　　1材料 　　1.1仪器 Agilent 1100系列高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），配有在线脱气机，四元泵，自动进样器，柱温箱和二极管阵列检测器；Agilent 6220 高分辨飞行时间质谱仪（美国安捷伦公司），配有标准电喷雾离子源（ESI），分析软件为MassHunter Data Acquisition在线工作站和Qualiative Analysis离线分析软件。DJ-04药材粉碎机（上海淀久公司）；METTLER AE240型1/10万电子天平（瑞士梅特勒公司）；KUDOS-SK2200H 超声发生器（上海科导超声仪器公司）。 　　1.2药品与试剂 迷迭香酸（批号111231-201019），积雪草酸（批号110892-201004），齐墩果酸（批号110709-201005）和熊果酸（批号110742-201016）对照品购自中国食品药品检定研究院（纯度99.0%），乙腈和甲酸为色谱纯（Fisher，USA），其余试剂均为分析纯，水为纯水。3批石见穿药材分别为产地湖北黄石，购自上海雷允上大药房，批产地安徽亳州，产地收集，批产地江西樟树，产地收集，批3批药材经第二军医大学生药教研室黄宝康副教授鉴定为唇形科植物石见穿S. chinensis的干燥地上部分。 　　2方法和结果 　　2.1对照品溶液的制备 精密称取迷迭香酸，积雪草酸，齐墩果酸和熊果酸对照品5.15，5.21，5.30，5.06 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释定容，配成质量浓度分别为515，521，530，506 mg?L-1的混合母液，精密吸取母液1 mL置于100 mL量瓶，加甲醇定容后，即得对照品混合溶液。 　　2.2供试品溶液的制备 精密称取石见穿药材粉末100 g（过40目筛），置3 000 mL圆底烧瓶中，加70%乙醇1 000 mL，加热回流处理2 h，放置室温，补足失重，摇匀，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得石见穿样品溶液。 　　2.3色谱条件 SHISEIDO MG C18色谱柱（3.0 mm×100 mm，3 μm）；流动相为乙腈（A）和水（含0.1%甲酸，B）；梯度洗脱，0～33 min，10%～90%A，33～40 min，90% A；进样量5 μL；流速0.6 mL?min-1；柱温25 ℃；柱后分流比为2∶1。 　　2.4质谱条件 采用ESI源，正离子模式，雾化气为高纯氮气。具体质谱参数：毛细管电压3 500 V，干燥气温度350 ℃，干燥气流速10 L?min-1，雾化气压力275 kPa，碎片电压180 V；参比离子m/z 121.050 8，922.009 7；扫描范围m/