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免疫组化EnVision二步法染色
石蜡切片免疫组化EnVision二步法染色
第一组2组
实验目的：
1.掌握石蜡切片免疫组化EnVision二步法染色的原理、步骤及结果分析
2.了解石蜡切片免疫组化EnVision二步法染色的临床应用
二、实验原理：
免疫组织化学技术是应用抗原与抗体接触后可形成“抗原－抗体复合物”的化学反应，以检测组织或细胞内抗原（或抗体）的技术。
EnVision二步法染色是通过一个葡聚糖分子，将多个抗小鼠或抗兔的二抗与多个辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）或碱性磷酸酶（AP)聚合在一起，形成一个免疫组化检测系统。
显色原理：将抗原抗体结合的部位显示出来。常用ＤＡＢ（３’３－二氨基联苯胺）：阳性细胞染成棕黄色(ＨＲＰ显色剂)，苏木素复染，核淡兰色，显色反应稳定，不褪色，应用最广。显色原理：
酶－－催化剂 Ｈ2Ｏ２－－底物 ＤＡＢ－－供氢体
反应原理：
ＨＲＰ＋Ｈ2Ｏ２－－ － －ＨＲＰ．Ｈ2Ｏ２
ＤＡＢ↓ (第一复合物)
ＨＲＰ．Ｈ2Ｏ２ －－－－ＨＲＰ＋Ｈ２Ｏ＋电子供体
(氧化型)
生成不溶于水和有机溶剂的有色终产物(棕褐色颗粒)和水，沉着在原来的位置上。
实验试剂与器材：
试剂：二甲苯试剂，梯度乙醇（70%、80%、90%、100%、），蒸馏水，3%H2O2，柠檬酸盐缓冲液，PBS（磷酸盐缓冲液），鼠抗人CK，鼠抗人C-erbB-2，HRPanti-Mouse/Rabbit，DAB显色剂
1%盐酸乙醇?分色2s ，水洗
梯度梯度乙醇脱水，70%、80%、90%、100%由低到高每缸浸泡2min
切片风干后中性树胶封片
实验结果与分析：
食管癌CK：
结果：染色阳性染色强，阳性颗粒定位性佳，组织结构清晰，除了出血部位和炎性区域有轻度背景外，多数组织片均无显著背景染色结果：染色阳性染色强，阳性颗粒定位性佳，组织结构清晰，除了出血部位和炎性区域有轻度背景外，多数组织片均无显著背景染色
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