Role of Defective Oct-2 and OCA-B Expression in Immunoglobulin中文翻译.docVIP

Oct-2、OCA-B的表达对原发渗出性淋巴瘤中的免疫球蛋白产生和人类疱疹病毒8裂解再生的作用 摘要：原发渗出性淋巴瘤（PEL）是B淋巴瘤的一种，以存在人类疱疹病毒8（KSHV）为特征。尽管PEL有高度分化的B细胞的基因型和基因表达特征，但是，PEL一般表达sIg或cIg。我们的研究表明转录因子Oct-2、OCA-B的缺乏在很大程度是这种缺失的原因。像Ig基因一样，ORF50是KSHV由潜伏状态到裂解再生的关键调控者，它的启动子里有octamer motif。因此，我们检测Oct-2、OCA-B对ORF50活性的影响。已有研究表明Oct-1结合到ORF50启动子上加强了ORF50的超激活能力。另一方面，我们发现，Oct-2抑制ORF50表达，结果也抑制了KSHV裂解再生，这种抑制是通过与Oct-1竞争在ORF50启动子上的结合位点来实现的。我们的数据表明在感染细胞里Oct-2的下调会有利于KSHV的有效再生过程。 1 引言 PEL是一种独特的霍奇金氏淋巴瘤B细胞，它常常存在于淋巴瘤裂解液中。从病理学角度看，KSHV可引发PEL、卡波西肉瘤多以及中心性巨大淋巴结增生症。无性繁殖系的Ig 基因重排和Ig基因的体细胞高度突变的鉴别表明，PEL来自于后生发中心 B 细胞。于此观点一致的是，像CD138/Syndecan-1 这样的浆细胞标志的表达，和BCL-6基因非编码区的体细胞高度突变。最近，PEL基因表达的分析导致了它类浆样细胞的分类，这是因为它显示的特征非常类似于艾滋病免疫母细胞性淋巴结瘤和多发性骨髓瘤。尽管有比较清晰的B细胞来源，但PEL细胞缺少许多B细胞标志的表达，包括CD19、CD20、CD22。此外，尽管重排的Ig基因没发生损坏性突变，但PEL细胞缺少表面免疫球蛋白的表达。介于前浆母细胞的来源，PEL细胞可能表达cIg而不是sIg。本实验，我们只发现极少的cIg水平，因此，研究这种不足的根本原因。 一个顺式控制元件，八聚体基序（octamer motif），ATGCAAAT，几乎可以在所有的Ig可变区、:IgH intron enhancer（Eμ ），还有一些IgH 3’enhancer。这个八聚体基序在Ig基因的转录中期重要作用。POU家族转录因子，普遍存在的Oct-1和B细胞限制性的Oct-2，结合在这个基序上需共激活剂OCA-B/Bob-1/OBF-1的辅助。最近研究证明，这些因子在浆母细胞瘤和T细胞淋巴瘤的融合物中维持Ig基因表达起作用。另外，他们还表明，Oct-1不能代替Oct-2对此起作用。而且，在典型的霍奇金病的HRS细胞中Ig基因的不正常表达，归因于Oct-2 和 OCA-B的下调。因此，我们检测一下是不是Oct-2、 OCA-B的表达缺失导致PEL细胞中Ig转录的减少。在此我们证明，Oct-2 、OCA-B在PEL的Ig基因转录中是起作用的，Oct-2 、OCA-B的缺乏解释了PEL中Ig基因表达谱的缺陷。 ORF50,被认为是KSHV由潜伏状态到裂解再生的分子开关，它的启动子中包含八聚体基序，Oct-1结合在上面促进ORF50表达的蛋白的结合，因此增强了它自身的超激活。考虑到这，我们很有兴趣研究是不是Oct-2 、OCA-B对ORF50产生了一定影响。我们实验提供了证据表明，Oct-2 可以结合在ORF50的启动子八聚体基序上，从而抑制了ORF50的活性，还抑制了裂解基因的表达和病毒颗粒的产生。当KSHV在B细胞中建立持续潜伏感染时，受到细胞的胁迫及免疫抑制，它就会转变为裂解循环状态。我们的研究数据表明，PEL中Oct-2 的出现会阻碍KSHV进入裂解循环的能力，这可能也解释了在感染细胞中Oct-2 的下调。 2 方法与结果 PEL肿瘤细胞表达低水平的cIg。在浆细胞、多发性骨髓瘤样本中，对于cIg检测，用标准方法检测不到轻链或重链。在nonplasma B细胞中，比如伯基特淋巴瘤细胞株Namalwa、 BJAB中，当敏感细胞增至可检测到轻链的水平，我们发现，检测κ或λ轻链，只有少部分的PEL细胞是弱阳性的(图1；表1)。在PEL细胞中检测到的cIg表达水平概括为表一。用免疫组织化学法、PT-PCR法检测，在全部的PEL细胞株中，轻链表达很少甚至没有。我们的数据加上前人的研究结果发现，Ig基因没有严重突变表明PEL细胞株中Ig表达的缺陷是在转录水平上。 图1.PEL细胞表达低水平的cIg。通过免疫组织化学芳来检测PEL细胞中检测κ或λ轻链表达水平。 表1.PEL细胞株BC1, BC2, BC3, BC5, BCBL1,BCP1, JCS1；伯基特淋巴瘤BJAB,Namalwa做阳性对照。 PEL细胞中缺少Oct-2和OCA-B的表达。在几乎所有的重链、轻链可变区的启动子、增强子和一些Ig(H) lo