2种聚合方法制备人参皂苷Rg1分子印迹聚合物分离材料比较研究.docVIP

2种聚合方法制备人参皂苷Rg1分子印迹聚合物分离材料比较研究 　　[摘要]为了从中药粗提物中定向分离人参皂苷Rg1及其结构类似物，获得高选择性、高富集率、高吸附性能的人参皂苷Rg1印迹聚合物分离材料，该研究分别采用沉淀聚合法和表面印迹法制备了分子印迹聚合物，并对其吸附性能做了对比研究，研究表明采用上述2种方法制备的人参皂苷Rg1的分子印迹聚合物对模板分子都具有较高的吸附性，其最大表观吸附量可分别达到27.74，46.80 mg?g-1；表面印迹法制备的聚合物的吸附性要明显高于沉淀聚合法制备的聚合物。试验结果表明，对于极性较强的人参皂苷Rg1，采用表面印迹法所制备的分子印迹聚合物具有更高的选择性和更好的吸附性能，为其他极性强的活性分子制备吸附性能良好的印迹聚合物提供了重要参考。 　　[关键词]分子印迹技术；沉淀聚合法；表面印迹法；人参皂苷Rg1 　　[收稿日期]2013-04-15 　　[基金项目]国家自然科学基金面上项目81260690；江西省科技支撑计划项目（20111BBG70004-2）；江西省教育厅科学技术研究重点项目（GJJ13618，GJJ12518） 　　[通信作者]尹小英，教授，主要从事药物分析研究，Tel：（010E-mail：ncyxoy@163.com 　　[作者简介]刘庆山，硕士生导师，主要从事药理学与民族创新药物研究，Tel：（010E-mail：nlqsh@163.com人参皂苷Rg1主要存在于人参、三七等中药材中，具有调节免疫、神经保护、心脑血管保护、促神经干细胞增殖等活性[1-3]。从上述大宗药材中提取，若采用常规分离技术，如柱色谱等，则操作复杂周期长，消耗大量化学试剂，造成环境污染，需要进一步研究成本更低、环境更友好的分离提取技术。分子印迹聚合物（molecularly imprinted polymers， MIP）对目标分子具有特异的选择吸附性，其理论基础是诺贝尔奖获得者Pauling提出的利用抗原铸造抗体的空间结合位点理论[4-5]。制备分子印迹聚合物的常用方法有沉淀聚合法、本体聚合法、悬浮聚合法、溶胀聚合法和表面印迹法等，其中沉淀聚合法是提出较早的一种聚合方法，由于其操作简单而应用较广泛，而表面印迹法则更多地应用于生物大分子印迹聚合物的制备。国内文献对人参皂苷Rg1??为模板制备MIP鲜有研究，可能是由于Rg1相对分子质量较大，极性较大，选择的致孔剂极性亦较大，易影响聚合物制备过程中模板分子与功能单体之间氢键的形成，从而导致MIP制备难度较大。本研究探索人参皂苷Rg1 MIP的适宜制备方法，也为相对分子质量较大、极性较强的活性分子MIP的制备提供重要实验依据，具有一定的推广价值。 　　1材料 　　UV-2550型紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；Quanta 200F扫描电镜（美国FEI公司）；HJ-5型多功能搅拌器（常州国华电器有限公司）；KQ-500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器系统有限公司）；HH-2型数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；ZYQ-211型恒温振荡器（黑龙江东拓仪器制造有限公司）。 　　人参皂苷Rg1（纯度98%购自江苏泽朗医药科技有限公司；α-甲基丙烯酸（MAA，分析纯）购自国药集团化学试剂有限公司；乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA，分析纯）购于日本东京化成工业株式会社（TCI）；偶氮二异丁腈（AIBN，化学纯）购自上海试四赫维生化有限公司；3-氨丙基三乙氧基硅烷（ATPS， 纯度97%）和溴化钾（化学纯）购自上海阿拉丁试剂有限公司；硅胶（200～300目）购于青岛海洋化工有限公司。乙腈为色谱纯，甲醇、冰醋酸、甲苯及其他试剂均为分析纯，均购自上海星可生化有限公司。 　　2方法与结果 　　2.1人参皂苷Rg1的MIP的制备[6-10] 　　2.1.1沉淀聚合法人参皂苷Rg1，功能单体MAA，交联剂EDMA以1∶5∶5的摩尔比例加入盛有丙酮150 mL的圆底烧瓶中，加热超声溶解；加入引发剂AIBN 10 mg溶解后，60 ℃水浴通氮气15 min，密封，60 ℃水浴聚合24 h；反应合成的聚合物经干燥后，用甲醇-冰醋酸（9∶1）以索氏提取的方式进行洗脱，洗去模板分子以及未聚合的功能单体和交联剂，直至紫外检测无以上物质的紫外吸收；再用甲醇洗去残留的冰醋酸，即得到人参皂苷Rg1的分子印迹聚合物，经60 ℃真空干燥后，备用。空白印迹聚合物（non-imprinted polymers， NIP）的合成除了不加入模板分子人参皂苷Rg1外，其余步骤等同于MIP的制备。 　　2.1.