丰城鸡血藤中刺芒柄花素大鼠肠吸收研究.docVIP

丰城鸡血藤中刺芒柄花素大鼠肠吸收研究 　　[摘要] 利用大鼠在体单向肠灌流模型，采用HPLC测定灌流液中刺芒柄花素含量，分别考察刺芒柄花素质量浓度、不同肠段以及P-糖蛋白抑制剂对刺芒柄花素肠吸收的影响，得出丰城鸡血藤中刺芒柄花素在大鼠体内的肠吸收机制。实验结果显示灌流液中刺芒柄花素质量浓度对吸收速率常数（Ka）和表观吸收系数（Papp）均无显著性影响；刺芒柄花素在小肠段（十二指肠、空肠和回肠）的Ka和Papp无显著性差异显著，但其Ka显著大于在结肠处的值（P 　　[关键词] 刺芒柄花素；单向肠灌流；重量法；吸收速率常数；表观吸收系数 　　丰城鸡血藤为豆科崖豆藤属植物丰城崖豆藤的干燥藤茎，为江西特色中药材，已被列入江西中药材地方标准，具有悠久的入药历史。黄酮类化合物为其主要生物活性物质，且多为异黄酮，具有较高药用价值[1]。其醇提取物中分离提取出的刺芒柄花素（7-羟基-4′-甲氧基异黄酮） 具有一定的抗肿瘤活性[2]，其抗肿瘤作用机制正在逐步揭示中。 　　研究药物的肠吸收机制和吸收部位对于指导各种制剂的处方设计，尤其是缓控释制剂的处方设计具有重要意义。预测口服药物体内吸收的方法有体外研究法、在体法和体内法等3种[3]，其中，体外研究法包括组织流动室法、外翻肠囊法、外翻环法、细胞培养模型法等；在体法主要是肠灌流法，包括单向灌流法和循环灌流法；体内法是通过口服给药，测定体内药量及尿中原型药物排泄总量，求算药物动力学参数，评价药物的吸收速度和吸收程度。而在体法因不损伤研究部位的淋巴和循环系统，明显优于体外研究法，其中单向灌流法（single pass perfusion modle， SPIP）能很好地模拟人体的体内环境，且试验结果与人体试验结果的相关性良好[4-5]，目前在国内外应用广泛。有关丰城鸡血藤中刺芒柄花素的肠吸收研究尚未见报道，本研究拟采用单向灌流法研究丰城鸡血藤中刺芒柄花素的大鼠肠吸收机制。 　　P-糖蛋白（P-gp）是肠道上皮细胞内存在的外排转运蛋白，对药物胃肠吸收有很大的影响，它们可将已进入肠道上皮细胞内的药物或药物代谢物外排转运至肠腔， 从而降低药物的胃肠吸收， 最终导致口服药物??物利用度的降低[6]。常用的P-gp抑制剂有环孢素A、维拉帕米、氯丙嗪、奎尼丁类[6]。本实验采用单向灌流法，考察维拉帕米作为P-gp抑制剂对丰城鸡血藤中刺芒柄花素肠吸收的影响。 　　1 材料 　　Agilent 1200 高效液相色谱仪（VWD检测器）；HL-2 恒流泵（ 上海沪西分析仪器厂）；FW100高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；HH-S数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）；SZ-93自动双重水蒸馏器（上海雅荣生化仪器设备有限公司）；IIIB循环水真空泵（浙江临海市精工真空设备厂）；SB3200超声清洗器（Shanghai Branson）；AB104-N 1/1万天平（梅特瑞-托利多仪器上海有限公司）；1/10万天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；微量移液枪（上海大龙医疗设备有限公司）。 　　丰城鸡血藤（丰城市科委提供并经江西中医学院赖学文教授鉴定为崖豆藤属鸡血藤）；刺芒柄花素（上海康九化工有限公司， 批号060819，纯度98%）；乌拉坦（国药集团化学试剂有限公司，批号；维拉帕米（中国食品药品检定研究院，批号100223-200102）；甲醇（色谱纯，上海星空生化有限公司）；聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯（吐温-80）为化学纯，液相用水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。 　　Kreb-Ringer′s营养液（K氏液，每1 L含NaCl 7.8 g，KCl 0.35 g，CaCl2 0.37 g，NaH2PO4 0.32 g，NaHCO3 1.37 g，MgCl2 0.02 g，葡萄糖1.4 g）； 　　雄性SD大鼠，体重（200±25） g，江西中医学院清洁级动物中心提供，合格证号SCXK（赣）2005-0001。 　　2 方法与结果 　　2.1 异黄酮类成分的提取 　　丰城鸡血藤用30倍量60%乙醇回流提取3次，每次40 min，将提取液浓缩，得稠膏，加2倍于药量的水溶解，过滤，滤液蒸去乙醇，加水使成每毫升含1 g生药的溶液。将溶液上AB-8型大孔树脂，充分饱和后，用90%乙醇0.8 mL·min1的流速洗脱有效成分，洗脱液浓缩后减压干燥，得丰城鸡血藤中主要异黄酮类成分（刺芒柄花素质量分数为0.25%）。 　　2.2 刺芒柄花素的测定 　　2.2.1 色谱条件 Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相甲醇-0.1%磷酸水（65∶35），以微孔滤膜过滤并经超声脱气处理；检测波长249 nm；流速1.0 mL·min1；柱温25 ℃