含RGD修饰丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒制备及工艺优化.docVIP

含RGD修饰丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒制备及工艺优化 　　[摘要] 目的 探讨丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒的制备及其工艺优化。 方法 采用乳化溶剂蒸发法制备丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒；考察单因素在纳米粒制备过程中的影响，包括TSⅡA载药纳米粒中的药物浓度、乳化剂浓度、有机相/外水相、超声时间和强度等的改变；并通过正交设计优化TSⅡA多级靶向纳米粒的制备工艺。 结果 本实验成功制备了含RGD修饰的丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒，优选工艺参数为：药物浓度1mg/mL，载体材料浓度20mg/mL，有机相/外水相为1∶10，超声强度和时间分别为200W，20×5s。 结论 此丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒的制备工艺切实可行。所制备的TNP包封率和载药量较高，为丹参酮ⅡA的临床应用提供了更广阔的前景。 　　[关键词] 丹参酮ⅡA；载药纳米粒；RGD；肿瘤靶向 　　[中图分类号] TQ461 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）03-09-04 　　丹参酮ⅡA（Tashinone ⅡA，TSⅡA）为传统中药丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）中的有效脂溶性成分。近年来研究表明，TSⅡA对多种肿瘤细胞均有明显的细胞毒作用[1-2]，但因丹参酮ⅡA难溶于水、体内代谢快、生物利用率低等缺点，限制其在临床上的广泛应用。课题组前期研究发现丹参酮ⅡA聚乳酸载药纳米粒（TSⅡA-PLA NPs）对肝癌有较好疗效[3-5]。本研究采用乳化溶剂蒸发法，制备含 　　RGD修饰的丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒（TSⅡA-mPEG-PLGA-PLL-cRGD NPs），可以增加药物半衰期，延长药物在体内的作用时间，同时显著提高对肿瘤的靶向作用。 　　1 仪器与材料 　　1.1 试剂 　　丹参酮ⅡA对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110766-200417，纯度99.3%）；Poloxamer188（德国BASF公司）；mPEG-PLGA-PLL、mPEG-PLGA-PLL-cRGD（上海市肿瘤研究所段友容课题组提供）；吉非罗齐（中国药品生物制品检定所，批号：100284-199801）；甲醇为色谱醇；其他试剂为分析纯。 　　1.2 主要仪器 　　激光粒度散射仪（Nicomp 380/ZLS，美国）；紫外分光光度计（德国Eppendorf公司）；微量电子分析天平（Sartotius CP225D）； Centrifuge 5804R低温高速离心机（德国Eppendorf公司）；质谱仪（API 3000，美国ABI公司）；XW-80A 型旋涡混合仪（上海医科大学仪器厂）。 　　2 实验方法 　　2.1 丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒制备 　　将含RGD修饰的空白纳米粒溶解于TSⅡA二氯甲烷溶液（0.8mg/mL）中，取mPEG-PLGA-PLL-cRGD（浓度20mg/mL）200μL，加入0.5%的乳化剂F-68的水溶液10mL，进行超声乳化。随后将制备的纳米粒溶液置入烧杯中，搅拌挥发有机溶剂，即得丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒[6]。 　　2.2 药物浓度测定方法 　　2.2.1 HPLC检测的色谱条件 色谱柱为Zorbax XDB-C18（150mm×4.6 mm，5μm），流动相为甲醇-水（85?15），流速为1mL/min，柱温为30℃，检测波长为270nm，进样量为20μL。 　　2.2.2 标准曲线的建立 精密称取TSⅡA 5mg，置250mL的量瓶中，加无水乙醇溶解并定容，作为丹参酮对照品储备液。分别精密量取一定量的对照品储备液稀释，得浓度为0.001，0.01，0.1，0.5，1，2，5，8，10，20μg /mL的标准溶液，HPLC测定。标准曲线由浓度（Concentration）对峰面积（Peak area）做线性回归所得。 　　2.2.3 单因素考察 改变载药纳米粒中的药物浓度，载体浓度，乳化剂浓度，有机相与外水相体积比，超声强度和超声时间等条件，制备丹参酮ⅡA多级靶向载药纳米粒，考察单因素对载药纳米粒的影响，筛选出较优的工艺参数。 　　2.2.4 正交实验 根据2.2.3实验结果，选择对载药纳米粒粒径大小、包封率、载药量影响较大的四个因素，分别为：药物/材料，乳化剂F-68浓度，有机相与外水相体积比和超声次数，每个因素3个水平进行正交实验设计。综合评价各因素的影响，确定最佳的载药纳米粒的处方和工艺。 　　3 结果 　　3.1 绘制标准曲线 　　标准曲线以药物浓度（Concentration）对峰面积（Peak area）做线性回归，见图1。 　　3.2 单因素考察 　　3.2.1 药物浓度 在实验中如选用较低的TSⅡA药物浓度时，载药纳米粒包封率会比较高，但载药量会随之降低，而