转基因动物课件 第三章 动物基因工程.pptVIP

第三章???动物基因工程 现代生物技术（生物工程）的简介 建立在分子遗传学、生物化学、微生物学以及化学工程、计算技术等基础上的现代生物技术，是20世纪后半叶蓬勃发展起来的新技术领域，为人类保健、农牧业、食品工业、环境保护等提供了强大的发展动力。 现代生物技术的内涵非常广泛并不断发展，目前主要有：基因工程、细胞工程、蛋白质工程、酶工程、糖工程、环境生物工程、转基因动物、克隆动物、基因治疗、生物制药、生物信息学、高级生物传感器。 第一节 基因工程概述 一、重组DNA技术的建立 1972年美国斯坦福大学的Berg获得了SV40和λDNA重组的DNA分子。  1973年美国斯坦福大学的Cohen 等人，将大肠杆菌R6-5质粒DNA（含卡那霉素抗性基因）和大肠杆菌pSC101质粒DNA（含四环素素抗性基因）重组后转化大肠杆菌，产生同时表现出两种抗性的细菌。 Cohen与Boyer等合作，将非洲爪蟾编码核糖体的基因同pSC101质粒构成重组DNA分子，并导入大肠杆菌，证实动物基因进入了细菌细胞，并在细菌细胞中增殖和转录产生相应的mRNA。 Berg P、Cohen和Boyer等人的工作是世界上第一次实现DNA体外重组，建立了第一个基因克隆系统（质粒—大肠杆菌），导致了一个全新的生物技术学科和产业——基因工程的诞生。 二、基因工程的概念 基因工程是一种DNA重组技术，在分子水平上进行遗传操作，按设计的蓝图，从供体中提取或人工合成目的基因，令其与载体构建成重组DNA，再转移到受体细胞，目的基因在细胞中表达获得新的遗传性状。 基因工程的操作程序：获取目的基因——目的基因与载体构建重组DNA分子——重组DNA分子转移至受体细胞——转化细胞的扩增、鉴定和筛选 基 因 工 程 示 意 图 基因工程的基本过程 分：分离目的基因 切：对目的基因和载体适当切割 接：目的基因与载体连接 转：重组DNA转入受体菌 筛：筛选出含有重组体的受菌体 基因工程技术策略 分： 基因载体 目的基因 质粒 噬菌体 病毒 直接分离 cDNA 人工合成 基因文库 切： 限制性内切酶 有缺口的载体 目的基因 接： 连接酶 粘端连接 平端连接 尾接法 重组体 转： 转化 转染 体外包装 带重组体的宿主 筛： 表型筛选 电泳法 核酸杂交 三、基因工程产生的意义  第二节 工具酶 一、限制性内切核酸酶(restriction enzymes) 能识别双链DNA分子中一段特异的核苷酸序列，在这一段序列内将双链DNA分子切断。 功能：降解外来DNA分子，以限制(restriction )或阻止病毒侵染 是细菌细胞为防御异源遗传物质进入的一种有效方式。 （一）限制性内切酶分类 第Ⅰ类限制性酶：每隔一段DNA序列随机切割双链DNA分子，没有序列特异性 第Ⅱ类限制性酶：能识别一段特异的