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* 第六节 提取分离 一、三萜化合物的提取与分离 （一）提取方法分为四类 （二）分离：通常采用反复硅胶吸附柱色谱法 二、三萜皂苷的提取与分离 （一）三萜皂苷的提取 1、三萜皂苷的通用提取方法 2、吸附树脂分离法 3、超声波超声提取 4、葡聚糖凝胶过滤法 （二）三萜皂苷的分离方法 1、溶剂沉淀法 2、重金属盐沉淀法 3、色谱分离法 ① 硅胶柱色谱： 是分离皂苷最常用的方法 ② 反相柱色谱： 常用于硅胶不易分离的极性皂苷 ③ 乙酰化衍生物分离法： 一般用于难以分离的皂苷 三、提取分离实例 —— 三七粉中皂苷的分离 生三七或熟三七粉 工业乙醇 乙醇提取物 回收乙醇 浸膏 加水溶解,乙醚萃取 水层 正丁醇萃取 正丁醇提取物 硅胶柱色谱 反相柱色谱 反相柱色谱 反相柱色谱 Rh1 Rg1,Rg2,R2 R1,Re,Rd Rb1,R4 人参皂苷Rb1 R1=Glc-Glc; R2=H; R3=Glc 人参皂苷Re R1=H; R2=O-Glc-Rha; R3=Glc 人参皂苷Rg1 R1=H; R2=O-Glc; R3=Glc 人参皂苷Rg2 R1=H; R2=O-Glc-Rha; R3=Glc 例2 生藤中皂苷的分离 生藤茎粉 工业乙醇 乙醇提取物 回收乙醇 浸膏 加水溶解,乙醚萃取 水层 正丁醇萃取 正丁醇提取物 D101大孔吸附树脂， H2O/EtOH梯度洗脱 30%乙醇洗脱液 硅胶柱色谱 氯仿/甲醇梯度洗脱 Fr1 Fr3 Fr1 RP-18柱，H2O-EtOH梯度洗脱 Fr20-30 SephadexLH-20 HPLC(RP18, 20%乙腈） 皂苷1 皂苷3 Fr3 RP-18柱，H2O-EtOH梯度洗脱 Fr22-23 SephadexLH-20 HPLC(RP18, 23%乙腈） 皂苷2 皂苷4 1、R1=OH；R2 =H 2、R1=H； R2 =β-D-Glc 3、R1=OH；R2 =H 4、R1=H； R2 =β-D-Glc 19 第七节 结构测定 ※ 概述 1、生源关系 2、化学方法 3、波谱学法 一、紫外光谱 1、结构中只有一个孤立双键，则在210nm左右出现一个微弱吸收； 2、如分子结构中存在共轭双键，则最大吸收向长波方向移动 ① α，β-不饱和羰基，最大吸收出现在242～250nm; ② 异环共轭双烯，最大吸收出现在240、 250、260nm； ③ 同环共轭双烯，最大吸收出现在285nm. 二、质谱 （一）Δ12-齐墩果烯类三萜 ① C环进行逆Diels-Alder(RDA)裂解，将分子分成两大部分，主要离子a含有D、E环，次 要离子b含有A、B环； ② 离子a是此类五环三萜烯的特征性碎片离子； ③ 如C-17位为-COOH、-CH2COOH取代，则离子 a易失去这些取代基而生成更稳定的碎片离子d; ④ 离子a系列的离子一般较强，常作为基峰。 （二）11-OXO，Δ12-齐墩果烯类三萜 （三）三萜皂苷 FD-MS与FAB-MS ① 获得皂苷的准分子离子峰[M+H]+、[M+Na]+ 、[M+K]+等； ② 负离子快原子轰击质谱给出[M-H]-峰。 ③ 根据碎片离子峰可判断糖的连接顺序 三、核磁共振谱 （一）1HNMR 在1HNMR的高场出现多个甲基单峰是三萜化合物的最大特征。 （二）13CNMR 1.三萜及其皂苷的每一个碳的信号都能给出. 2.糖的苷化位移现象 3、羟基取代位置及取向的确定 4、糖上乙酰基的确定 四、结构测定实例——柴胡皂苷r 1、理化性质 ① 白色粉末，mp 241～243℃; ② Libermman-Burchard反应与Molish反应 均为阳性 2、UV λmax: 243、251、260nm 3、1HNMR ① δ0.89,0.99,1.02,1.23,1.67 ppm 出现五个甲基质子峰 ② δ6.77（1H,d,J=10Hz）, δ5.69（1H,d,J=10Hz） 4、13CNMR ① 30个碳信号 ② δ136.5，133.0，126.2,126.4有吸收 ③ 苷元的13CNMR特征吸收 δ68.2，64.6，65.3, 73.6, 82.6ppm 5、薄层酸水解： 获得呋糖与葡萄糖 6、温和酸水解：只获得葡萄糖 7、与标准品苷元的Rf值及13CNMR数据比较 8、HMBC（异核多键相关试验） 9、得柴胡皂苷r的结构 第八节 生物活性 一、抗炎活性 二、抗肿瘤活性 三、抗菌和抗病毒活性 四、