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免疫组化在病理诊断中的应用 免疫组织化学简介 随着各种医学技术突飞猛进的发展，病理诊断技术也在不断进步，形态学研究和病理诊断方法日益增多和完善，免疫组织化学技术是近年来发展起来一门新兴学科。 免疫组化是免疫技术和组织病理学制片巧妙的结合在一起，在组织细胞原位显示某种抗原成分，对疾病尤其是肿瘤诊断、鉴别诊断和发病机制、肿瘤的预后、治疗研究等等，提供了强有力的手段。 免疫组织化学技术是免疫学与组织化学两种技术的结合，它的基本原理是应用抗原与抗体的特异性结合，再用显色剂显色达到标记细胞的某种抗原物质的定性与定位检测技术，是一种方法简单，且有效的肿瘤标记技术。 免疫组化的原理 免疫组织化学的基础原理是，应用抗原与相应抗体接触后可形成抗原-抗体复合物的化学反应，来检测组织或细胞内的某些成分。一般在免疫反应的抗原-抗体复合物在显微镜下是不可见的，但在抗体上联合应用某种指示剂，则可使此复合物成分可见。 免疫组化方法 为使免疫复合物成分可见，可在抗体应用上联合某种指示剂，如指示剂为荧光素，此抗体称荧光素抗体，如指示剂为酶，此抗体为酶标记抗体。免疫组化常用方法有免疫荧光法，免疫酶标法，免疫金银法等。 免疫酶标法操作过程相对简单，在普通显微镜下即可观察，对位准确，对比度好，染色标本可长期保存，可以用苏木素复染，从而与形态相结合。由于具备以上优点，故免疫酶标法被一般实验室广泛采用。 免疫酶标法主要有：过氧化物酶抗过氧化物酶法（PAP）、碱性磷酸酶抗过氧磷酸酶法（A-PAAP）、亲和素-生物素复合法（ABC)、标记链亲和素过氧化物酶-生物素法（SP法）我科室目前采用SP法。 免疫组化在病理诊断和研究中的应用 确定细胞类型 辨认细胞产物 了解分化程度 鉴定病变性质 确认扩散范围 辨别特殊细胞 探讨肿瘤起源 指导治疗和预后 进行疾病分类 确定细胞类型 在理工作中，往往遇见许多形态学类似或低分化的肿瘤，缺乏特异性，这些肿瘤双向或多向分化，还有大量小细胞肿瘤，只凭HE常规切片组织学检查不易确定其瘤细胞的组织起源，是癌还是肉瘤，平滑肌还是横纹肌等等这些病例通过免疫组化90%的还可得到解决。 辨认细胞产物 利用某些细胞产物为抗原制备的抗体，可作为相应产物的特殊标记。如内分泌细胞产生的各种激素，大多数可用免疫组化技术标记出来，据此可以对内分泌肿瘤做功能分类，检测分泌异位激素的肿瘤。 了解分化程度 大多数标记物都有其特定的分布部位，如上皮细胞膜抗原（EMA)着色部位在细胞膜上，但分化差的乳腺胞质内亦可见阳性颗粒；角蛋白的含量也和分化程度有关，低分化或未分化癌含量较低，染色较弱。 鉴定病变性质 淋巴结的反应性增生和恶性淋巴瘤不易鉴别时，可做T和B细胞标记，如果单一细胞弥漫分布则考虑淋巴瘤，而反应性增生细胞都有，其分布也有一定规律。乳腺恶性增生如突破基底膜和/或破坏肌上皮细胞，则考虑为癌了。 确认扩散范围 某些癌的早期转移，有时与淋巴结内窦组织增生不易区别，可用上皮标记鉴别。对于转移性肿瘤亦可借免疫组化标记寻找原发瘤，如骨组织内有前列腺特异性抗原阳性的细胞，提示前列腺癌转移。 鉴别特殊细胞 有些细胞，如表皮内的Langerhanscell、黑色素细胞，淋巴结内的指突状和树突状网织细胞，光镜下不易鉴别，但免疫组化标记（S-100蛋白等)能清楚地显示其形态。 探讨肿瘤起源 一些来源不明的肿瘤长期争论不休，最后通过免疫组化标记取得共识。如颗粒性肌母细胞瘤，曾被认为是肌原性，但是肌原性标记阴性，而神经性标记阳性，证明为神经来源的（神经鞘细胞）。分化很差的肿瘤，病理诊断上按细胞形态分为梭形细胞肿瘤、小圆细胞肿瘤等，通过多种标记的联合应用，亦可知道其来源。 寻找感染原因 对于感染性疾病，也利用特定的抗体寻找感染源，如巨细胞病毒（CMV)、人乳头瘤病毒（HPV)、单纯疱疹病毒(HSV)、乙肝病毒（HBV）等。已有标志物，帮助解决病因诊断问题。 指导治疗和预后 现已公认，乳腺癌雌激素受体（ER)、孕激素受体(PR)阳性者，内分泌治疗效果好。但是Her-2蛋白过表达的患者5年生存率仅为28%，而阴性者5年生存率可达71%，淋巴结转移乳腺癌中Her-2阳性率可明显增高，有淋巴结转移且Her-2蛋白过表达时预后极差，5年生存率仅为3.4%。肿瘤增值性标记如Ki-67，癌基因和抑癌基因标记如p53蛋白、Nm23(转移抑制基因）等亦与肿瘤预后有关。 多药耐药基因蛋白（P-Gp）--药泵作用--胞膜/胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。 谷光甘肽S转移酶（GST π）--解毒作用--胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。 N-myc表达增强的