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PAGE PAGE II 免疫学实习指导 序 言 本实习指导内容的安排与免疫学理论课的内容相衔接，主要包括免疫学的经典实验，即吞噬细胞吞噬功能检测、补体结合试验、T淋巴细胞转化试验、免疫标记技术（膜表面免疫球蛋白的检测、ELISA）、溶血空斑试验、沉淀反应。细胞凋亡的检测为新增加的实验。 本指导旨在让学生在有限的时间内学到现代免疫学常用的实验方法和技术，并使学生通过实验课的学习进一步认识和巩固课堂所学的知识，同时培养学生的实际操作能力及分析问题、解决问题的科学思维能力。 本指导适用于我校8年制、6年制、5年制的基础、临床、预防、口腔医学及护理、药学专业。不妥之处望指导教师和学生在使用过程中坦诚指出，并请认真填写本书后的意见反馈表，以利进一步改进。 实验室规则 进入实习室做实验要穿白大衣。 除实验中必用的学习用品外，其他物品不要放在实验台上。书包放桌屉内，衣帽挂衣架上。 实习室内不允许吃食物或饮料，严禁吸烟。 实验中一定要保持实习室安静，彼此讨论问题时不要大声喧哗、严禁打闹。 实验过程要按照教师要求进行操作，如有疑问要请教指导教师。 爱护实验器材，如有损坏应及时报告教师，需赔偿者按规定办理。 实验完毕，要清理台面。需冲洗的物品按要求冲洗，需收回的物品按要求摆放整齐送回教学准备室。 值日生要做好值日，离开实习室时，一定要有专人负责关好门窗、水源及照明设备。 目 录 实验一、免疫器官（示教） （1） 实验二、单向、双向免疫琼脂扩散和免疫电泳（示教） （4） 实验三、吞噬细胞功能检测 （10） 实验四、直接免疫荧光法检测B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白（12） 实验五、体外抗体形成细胞检测——液相小室法（PFC） （14） 实验六、T淋巴细胞转化试验（MTT法） （16） 实验七、酶联免疫吸附试验（ELISA） （18） 实验八、细胞凋亡检测 （21） 实验九、补体介导的细胞毒试验 （26） 实验十、E玫瑰花环形成试验（示教） （28） 意见反馈表 （30） 实验一、免疫器官 (Organs of the Immune System) 免疫器官包括中枢免疫器官和外周免疫器官。在哺乳类动物，中枢免疫器官包括胸腺和骨髓；在禽类，中枢免疫器官包括胸腺和法氏囊。外周免疫器官有淋巴结、脾脏等。（本实验属于示教内容） 胸腺（Thymus） 胸腺位于胸腔纵隔上部，胸骨后方。人类胸腺在胚胎期及出生后2岁内生长很快，体积较大；2岁后到青春期发育仍很快；但青春期后开始萎缩，逐渐由脂肪组织所代替，它在机体免疫功能的建立上占有重要地位。骨髓内有部分淋巴细胞迁移到胸腺内，在胸腺素的影响下，增殖分化成为具有免疫功能的T细胞，再经血流输送到淋巴结和脾等周围免疫器官发挥免疫功能。若新生期切除胸腺或胸腺生长肿瘤，可导致细胞免疫功能显著下降，常因感染而死亡。 胸腺的组织结构：胸腺分左右两叶，表面覆盖有一层结缔组织被膜，被膜深入实质将实质分割成若干小叶。胸腺小叶的外层为皮质，内层为髓质。胸腺皮质区分为浅皮质区和深皮质区。皮质区内85%-90%的细胞为未成熟的T细胞。髓质区内有大量的胸腺上皮细胞和稀疏分散的较成熟的胸腺细胞、单核-巨噬细胞和树突状细胞。 标本：胎儿胸腺、胸腺组织切片 图1.不同年龄期的胸腺示意图 骨髓(Bone marrow) 骨髓位于骨髓腔中，分为红骨髓和黄骨髓。红骨髓有造血功能，由造血组织和血窦构成。造血组织主要由基质细胞和造血细胞组成。基质细胞包括网状细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞等。骨髓是各类血细胞和免疫细胞发生的场所。骨髓又是B细胞分化成熟的场所和体液免疫应答发生的场所。因此骨髓既是中枢免疫器官又是外周免疫器官。 标本：骨髓组织切片 法氏囊（Bursa of Fabricius） 在禽类，法氏囊是位于泄殖腔上方的一个囊状物，内充满着淋巴组织，其中淋巴细胞不断受囊素的影响，发育成B淋巴细胞。若新生期切除法氏囊，抗体的形成将受影响，而细胞免疫功能不受影响。对于B淋巴细胞发育而言，禽类的法氏囊具有哺乳类动物骨髓相似的作用。 标本：鸡法氏囊 淋巴结（Lymphoid node） 淋巴结的实质分为皮质区和髓质区两部分。皮质区分为浅皮质区和深皮质区两部分。浅皮质区靠近