免疫学检原理及临床应用课件.pptVIP

免 疫 学 检 测 原 理及 临 床 应 用 一、基于抗原抗体反应的检测方法 ㈠ 抗原抗体结合反应的特点  1.高度特异性  2.抗原抗体结合的带现象与可见性  3.可逆性 ㈡ 影响抗原抗体反应的因素 1.电解质  2.酸碱度  3.温度 4.抗原和抗体的性质 ㈢抗原抗体反应的基本检测方法 1凝集反应 颗粒性抗原（如细菌、细胞）与相应抗体，在适当电解质存在的条件下，经过一定时间后出现肉眼可见凝集块，称为凝集反应 2 沉淀反应 可溶性抗原（如细菌浸出液，组织浸出  液和 动物血清等）与相应抗体结合后， 在电解质存在条件下，经过一定时间作 用后，可出现肉眼可见的沉淀物，称为 沉淀反应  ⑴ 单向扩散试验  是一种定量试验，使抗原在含有抗体的琼脂  介质中扩散，经一定时间后即可见抗原孔周 围出现由抗原抗体复合物形成的沉淀环。沉 淀环的直径与抗原浓度成正比。故试验前应 用已知不同浓度标准抗原制成标准曲线（纵 座标为沉淀环直径，横座标为抗原浓度）， 可根据沉淀环直径的大小从标准曲线中查出 待检样品中抗原的含量。临床上常用于测定 IgG、IgM、IgA的含量 ⑵双向扩散试验  抗原与抗体在琼脂介质中相互扩散，如抗原  抗体相应且浓度比例适当，则在抗原抗体之 间可出现白色沉淀线。一对相应的抗原抗体 只能形成一条沉淀线；多种抗原抗体系统， 测可形成多条沉淀线 ⑶免疫电泳  ⑷免疫比浊 3 补体参与的反应 补体结合试验、溶血空斑试验4 免疫标记技术 免疫标记技术是指用荧光素、酶、同位素或电  子致密物质等标记抗体或抗原所进行的抗原抗 体反应 优点：特异、敏感、快速、能定性、定量甚 至定位，且易于观察 ⑴免疫荧光法 ⑵ 酶免疫测定 酶免疫技术是通过适当的酶促化学反应和免  疫反应，使抗体（或抗原）与酶蛋白分子结 合，形成酶标抗体（或抗原），该结合物保 留免疫学活性和酶活性，因而既有抗原抗体 反应特异性，又有酶促反应的特异性。酶分 解底物后的显色深浅可反映标本中抗原或抗 体的含量 常用酶 辣根过氧物酶、碱性磷酸酶 *酶联免疫吸附试验（ELISA） 间接法 用于测抗体 包被抗原→加待测标本→加酶标抗体→加底物 →终止反应→测OD值 双抗体夹心法 用于测抗原 包被抗体→加待测标本→加酶标抗体→加底物 →终止反应→测OD值 *酶联免疫斑点试验 *BSA-ELISA⑶免疫组化技术⑷放射免疫测定法⑸化学发光免疫分析⑹免疫印迹法 二免疫细胞检测 ㈠免疫细胞及其亚类计数 ㈡淋巴细胞功能测定 1 体外试验 ⑴淋巴细胞增殖试验 ⑵细胞毒试验 ⑶分泌功能测定 2 体内试验 三免疫分子检测 ㈠免疫球蛋白测定 ㈡补体测定 ㈢细胞因子检测 ㈣CD分子、表面受体和黏附分子的检测 ㈤HLA分型 * * 前带现象 后带现象 凝集反应种类  ⑴直接凝集反应  ⑵间接凝集反应 是将可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的  载体上，使之成为致敏载体颗粒，然后与相 应抗体或抗原作用，在电解质参与下出现的 凝集反应  ⑶间接凝集抑制反应 将可溶性抗原与相应抗体预先作用，然后再 加入致敏载体悬液，由于抗体已被可溶性抗原 结合，因而致敏颗粒不发生凝集现象，称为 间接凝集抑制试验 *