链霉菌UDP-葡萄糖脱氢酸编码基因Ste的克隆表达和性质研究.docVIP

链霉菌UDP-葡萄糖脱氢酸编码基因Ste6的克隆表达和性质研究 遗传学报ActaGeneticaSinica,November2005,32(11):1213—1220SSN0379—4172 Cloning,ExpressionandCharacterizationoftheSte6Gene EncodingaUDP-glucoseDehydrogenaSein LIHao,WANGLing—Yah,XUGui-Yun, CHENYang,JIANGRong, LIYuan① (1.InstituteofMedicinalBiotechnology,ChmeseAcademyofMedicalSciences,Be?枷9100050,China 2.1nst|tuteofChemistry.CheeseAcademyofSciences,Be{jlng,00080chIna Abstract:Streptornycessp.139wasidentifiedtoproduceanewexopoIysaccharideEbosin(139A)withanti— rheumaticarthritisactivityvivo.TheEbosinbiosynthesisgenecluster(31.3kb:GenBankAccessionNumber: AY131229)containing22ORFs(stel—ste22)ofStreptomycessp.139hadbeenreportedpreviously.Inthispa- per,wepresentexperimentalevidencefortheidentityoftheste6geneproductasaUDP—glucosedehydrogen— ase(UDPGDH).WithpET-30aasvector,thegenewasclonedandexpressedinEscherich~coilBL21(DE3). Theexpressedproteinwaspurifiedtohomogenei~byHis—Bindresinaffinitychromatograpyanditwasableto catalyzeUDP—glucosetoUDP—glucuronicacid.Toevaluatethefunctionofste6,thegenewasdisruptedbya single--crossoverhomologousrecombinationeventandtheresultshowedthatste6isrequiredinEbosinbiosyn?? thesis. Keywords:ste6;UDP-glucosedehydrOgenase;genedisruption;Ebosinbiosynthesis 链霉菌UDP-葡萄糖脱氢酸编码基因 Ste6的克隆表达和性质研究 李颢,王玲燕,徐桂云,陈阳, (1中国医学科学院医药牛物技术研究所 2.中国科学院化学研究所,北京 姜蓉,李 ,北京100050; 100080) 元,① 摘要:链霉菌139能够产生一种全新的胞外多糖——依博素(139A),该多糖体内具有显着抗类风湿性关节炎 活性.其生物合成基因簇(GenBankAccessionNumber:AY131229)已被鉴定约31.3kb,包含22个开放阅读框 (stel～ste22).以pET一30a为载体,克隆并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了ste6基因的表达,对该基因的克 隆,表达与性质进行了研究.亲和层析法证实,纯化后重组蛋白具有催化UDP-葡萄糖脱氢变成UDP-葡萄糖醛酸 的活性.这表明ste6编码产物是葡萄糖脱氢酶.为了证实ste6基因与依博素生物合成的关系,采用单交换基因 破坏策略构建了ste6基因阻断突变株.结果初步显示ste6和依博素生物合成相关. 关键词:ste6;UDP-葡萄糖脱氢酶;基因阻断;依博素生物合成 中图分类号:Q786文献标识码:A文章编号:0379-4172(2005)11-1213-06 收稿日期:2005—01—07;修回日期:2005—03—09 基金项目:国家高科技项目基金(编号:2001AA一21409)[SuppodedbytheChineseNationalHighTechnologyProject(No.2001AA一 21409)] 作者简介:李颢(1981一)男,江苏南京人,在读硕士生,研究方向:微生物与生物药学 ①通讯作者.E-mail:yuanwli@263.net;Tel:010l214遗传学报ActaGeneticaSinicaVo1.32No.11200