科学教育生化实验2010.ppt

【实验步骤】 1.凝胶的制备 （1）准备工作 ：用1%的琼脂密封 （2）制备小孔胶（分离胶） 凝胶浓度（%）7.5 双蒸水（ml）1 1号液（ml） 1 2号液（ml） 2 3号液（ml） 4 总体积（ml）8 2. 电泳槽安装 3．加样 ：待分离样品的制备：40%蔗糖10μl，血清10μl，溴酚蓝5μl混匀 用微量注射器吸取30μl的样品 4．电泳：负极在上，正极在下，开通电源。电流可调节到3~5mA/管 5.剥胶 6. 固定与染色： 将取下的胶条放入染色液中，在室温下，固定染色10min。 7. 脱色： 将染色完毕的胶条用脱色液浸泡，中间更换1~2次脱色液并浸泡过夜，将浮色脱去进行观察染好色的蛋白带 。 实验五：酶的特性 目的：加深对酶的性质的认识目的 （一）温度对酶活力的影响 1.原理 酶的催化作用受温度的影响。最适温度下，酶的反应速度最高。 酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显的改变，但在100℃的溶液中却很快地完全失去活性。低温能降低酶或抑制酶的活性，但不能使酶失活。 淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。 2.器材：试管及试管架、恒温水浴、冰浴、沸水浴　 3.试剂和材料 0.2%淀粉的0.3%NaCl溶液　　 新鲜配制稀释10-20倍的唾液(用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一口蒸馏水，半分钟后使其流入量筒并稀释10-20倍。混匀备用。) KI－I2碘溶液 4.操作 　取3支干燥的试管，编号后按下表加入试剂： 管号 1 2 3 0.2%淀粉溶液（ml） 1.5 1.5 1.5 稀释唾液（ml） 1 1? 煮沸过的稀释唾液（ml）? 1 摇匀后，将1、3号试管放入37℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10分钟后取出（将2号内液体分两半），用KI－I2溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。将2号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10分钟后，再用KI－I2液实验，记录实验结果。 （二）唾液淀粉酶的激活及抑制 1.原理　　 酶的活性受激活剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。 2.器材 ：恒温水浴、试管及试管架 3.试剂和材料 　　 0.1%淀粉溶液 ；稀释20倍的新鲜唾液；1% NaCl溶液；1% CuSO4溶液 ；1%Na2SO4溶液 ；KI－I2溶液 4.操作 管号 1 2 3 4 0.1%淀粉溶液（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5 稀释的新鲜唾液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 1% NaCl溶液（ml） 0.5 － － － 1% CuSO4溶液（ml） － 0.5 － － 1% Na2SO4溶液（ml） － － 0.5 － 蒸馏水（ml） － － － 0.5 37℃恒温水浴中保温10分钟 KI－I2溶液（滴） 1～2 1～2 1～2 1～2 （三）　酶的专一性 1.原理　酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉