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应用绿色荧光蛋白标记技术示踪细菌移位的实验研究 第13卷第2期 2006年3月 肠外与肠内营养 Parenteralamp;EnteralNutrition ? 65? Vol_13No.2 Mar.2oo6 应用绿色荧光蛋白标记技术示踪 细菌移位的实验研究 宋德胜,李幼生,于宝军,许哲,陈彻,黎介寿 要解放军黼江苏南 ? 论着? 摘要:目的:利用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术明确化疗时是否存在细菌移位.方法:将30只sD大鼠随机分 为三组:空白对照组,对照组和甲氨蝶呤(MTX)组,每组10只.给对照组和MTX组大鼠灌饲GFP标记的大肠杆菌 TG1对移位的细菌进行示踪,MTX组大鼠皮下注射MTX制作大鼠化疗模型.使用荧光显微镜及质粒酶切电泳鉴 定内脏分离出的细菌是否来源于肠道.结果:在应用MTX大鼠的肠系膜淋巴结,肝,脾和肾,均可分离出GFP标 记EcoliTGI.结论:MTX能引起细菌移位,在细菌移位的动物实验研究中,GFP示踪技术是一种简单,可靠和 有效的方法. 关键词:细菌移位;绿色荧光蛋白;甲氨蝶呤 中图分类号:R446文献标识码:A文章编号:1007—810X(2006)02-0065-03 GIi1PlabelingEscherichiacoliTG1tracksbacterialtransl0cati0n SONGDe—sheng,LIYou—sheng,YUBao-jun,XUZhe,CHENChe,LIJie—shou (ResearchInstituteofGeneralSurgery,ClinicalSchoolofMedicalCollege,NanjingUniversity/Nanjing GeneralHospitalofNanjingMiliterayCommand,咒A,Nanjing210002,Jiangsu,China) Abstract:Objective:ToconfirmthebacterialtranslocationinducedbyMethotrexate(MTX). Methods:ThirtySprague-Dawley(SD)ratswererandomlydividedintothreegroups:blankgroup(n= 10),controlgroup(n=10),MTXgroup(n=10).TheratsofcontrolgroupandMTXgroupW— eregavagedEscherichiaColi(E.coli)TG1labeledwithgreenfluorescentprotein(GFP)totrackbacte— rialtranslocation.TheratsofMTXgroupweretreatedwithMethotrexatetoinducebacterialtransloca— tion.Representativetissuespecimensfromthemesentericlymphnodes(MLNs),spleen,liverandkide- nywereasepticallyharvestedforbacteriacultureinampicillin-supplementedmedium.Results:The— bacterialabeledwithgreenfluorescentproteinweredetectedintissuespecimensharvestedfromratstrea. tedwithMTX.butwerenotdetectedintheothergroups.Conclusion:MTXcaninduceintestinalbac- terialtranslocationinrats.GFPisastable,simple,usefulmarkerforinvestigationofintestinalbacterial translocationinanimals. Keywords:Bacterialtranslocation;Greenfluorescentprotein;Methotrexate. 收稿13期:2005-06-27;修订13期:2005-08—24 基金项目:国家自然科学基金资助项目(批准号;国家重点基础研究发展计划(973计划)(批准号:2003CB5I5502) 作者简介:宋德胜(1966一),男,安徽滁州人.主治医师.医学博士.从事普通外科疾病诊治工作. - 66?肠外与肠内营养2006年3月第l3卷 0引言 肠道内的微生物越过肠黏膜屏障,大量侵入 正常情况下是无菌的肠道以外组织的过程,称为 肠道细菌移位.其结果可能引发肠源性的全身