高效液相色谱类课件.pptVIP

二 分离类型 液固吸附色谱 离子交换色谱 液液分配色谱及键合相色谱 尺寸排阻色谱 液固吸附色谱 液固色谱是最古老的色谱法。其分离原理是溶质分子和溶剂分子在作为固定相的固体吸附剂活性表面上的竞争吸附。因此，液固色谱又常称为吸附色谱或液固吸附色谱。 液固吸附色谱适用于分离中等分子量的油溶性样品，对具有不同官能团的化合物和异构体有较高的选择性。凡是能用薄层色谱成功分离的化合物，都可用液固色谱进行分离。 对强极性分子或离子型化合物有时会发生不可逆吸附．此外，液固色谱分离同系物的能力较差。 固定相与流动相 最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝 流动相：有机溶剂 选择流动相的基本原则是 极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相 流动相的含水量对分离影响很大 固定相 极性吸附剂：硅胶、氧化铝、氧化镁、硅酸镁、分子筛、聚酰胺等 非极性吸附剂：活性炭 极性吸附剂 酸性：硅胶、硅酸镁 酸性吸附剂适于分离 碱、如脂肪胺和芳香胺 碱性：氧化铝、氧化镁、聚酰胺 碱性吸附剂适于分离酸性溶质，如酚、羧酸和吡咯衍生物 硅胶的表面结构和性质 硅胶处理 未经加热处理： 表面羟基被物理吸附水覆盖，没有吸附活性 150－200℃度长期加热： 表面吸附水完全失去，硅胶上只剩下表面羟基，相邻羟基形成氢键，表面吸附活性最强 200－400℃： 硅羟基脱水成硅氧烷基 700℃： 全部硅羟基不可逆变为硅氧烷基 硅胶的重要性质 比表面积：多孔固体的比表面积Sp＝外表面Se和内表面Si之和，比表面积越大，溶质的保留值越大。孔径与比表面积成反比。比表面积越大，孔径越小。根据孔径大小，硅胶可分为：小孔硅胶（2nm）大孔硅胶（50nm）和中孔硅胶（2到50nm）小孔硅胶对分子量大的溶质回产生排阻现象。而且表面积上的游离硅羟基数也减少。所以小孔硅胶可能造成不可逆吸附。 孔径增大时，多空硅胶的机械强度下降。 表面活性硅胶真空条件下200℃长时间加热可以得到具有标准活性的硅胶，失去了全部物理吸附水，活性最强。但干燥或彻底活化的硅胶不适用于作色谱分离。 1可能发生不可逆吸附或催化反应 2线性容量低 3有时柱效差 4每批的保留值有变化 需加入适量的水 线性容量指在线性等温线范围内单位重量的硅胶能够负载样品的量Snyder用θ0.1表示，即每克吸附剂使某样品的容量因子降低10％的样品重量。少量样品时k’与样品量无关，线性容量取决于样品的结构、溶剂的组成、硅胶的性质和温度。对于给定的溶质和溶剂，取决于硅胶的比表面积和表面活性。比表面积越大线性容量越高表面活性越高负载量越小。 流动相 吸附色谱控制分离选择性和分离速度主要靠选择合适的流动相来实现 复杂混合物必须用二元或三元混合溶剂体系来提高分离选择性。溶剂极性相差很大时注意分层问题 流动相含水率的控制对分离影响很大 离子交换色谱 离子交换色谱以离子交换树脂为固定相，树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时，组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆交换，根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。 固定相与流动相 固定相为离子交换树脂 阳离子交换树脂 阴离子交换树脂 离子交换树脂的流动相最常使用水缓冲溶液，有时也使用有机溶剂如甲醇或乙醇同水缓冲溶液混合使用，以提高特殊的选择性，并改善样品的溶解度 液液分配色谱及键合相色谱 在液液色谱中，一个液相作为流动相，而另一个液相则涂渍在很细惰性载体或硅胶上作为固定相。流动相与固定相应互不相溶，两者之间应有一明显的分界面。分配色谱过程与两种互不相溶的液体在一个分液漏斗中进行的溶剂萃取相类似。 固定相 液液色谱的固定相由载体和固定液组成 全多孔型微粒载体，由nm级的硅胶微粒堆积而成，又称堆积硅珠，颗粒小，柱效高是目前使用最广泛的一种载体 液相色谱中，由于流动相参与选择作用只需几种不同极性的固定液即可。如?，?? —氧二丙腈（ODPN），聚乙二醇（PEG），十八烷（ODS）和角鲨烷固定液等。 流动相 除一般要求外，流动相对固定相的溶解度还要尽可能小，因此固定液和流动相的性质往往处于两个极端 正相分配色谱：以极性物质作为固定相，非极性溶剂作流动相的液液色谱，称为，适合于分离极性化合物； 反相分配色谱选用非极性物质为固定相，而极性溶剂为流动相的液液色谱，这种色谱方法适合于分离芳烃、稠环芳烃及烷烃等化合物。 键合相色谱 液液色谱尽管选用与固定液不互溶的溶剂作流动相，但在色谱过程中固定液仍会有微量溶解。以及流动相经过色谱柱的机械冲击，固定相会不断流失。 70年代初发展了一种新型的固定相—化学键合固定相。这种固定相是通过化学反应把各种不同的有机基团键合到硅胶（载体）表面的游离羟基上，代替机械涂渍的液体固定相。这不仅避免了液体固定相流失的困扰，还大大改善