tgf-β1通过erk12信号通路促进人肝星状细胞lx-2中hmga1基因的表达-tgf - β 1 promotes hmga 1 gene expression in human hepatic stellate cell lx - 2 through er k12 signaling pathway.docx

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2018-06-28 发布于上海
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tgf-β1通过erk12信号通路促进人肝星状细胞lx-2中hmga1基因的表达-tgf - β 1 promotes hmga 1 gene expression in human hepatic stellate cell lx - 2 through er k12 signaling pathway

ABSTRACTObjective:TheaimofthisstudyistoinvestigatewhetherTGF-β1promotestheexpressionofHMGA1throughERK1/2andorAktpathway.Methods:InordertoelucidatethemolecularmechanismwherebyTGF-β1up-regulatesHMGA1,weincubatedtheLX-2cellswithdifferentconcentrationofTGF-β1,anddetectedthemRNAlevelofHMGA1withRealtime-qPCR.Further,weusedTGF-β1andPD98059(MK2206)totreatLX-2cells,andusedwesternblottodetecttheproteinlevelofpERK1/2,pAkt,ERK1/2,AktandHMGA1,usedRealtime-qPCRtodetectthemRNAlevelofHMGA1.Results:1、Weobservedadose-dependentlyincreaseofHMGA1inthepresenceofTGF-β1,whichwasuptoapeakat5ng/ml.2、WeshowedthatTGF-β1markedlyinducedtheactivationofERK1/2andAktpathway.3、WeshowedthatTGF-β1markedlyinducedtheexpressionofHMGA1，andtheinhibitorofERK1/2pathwaysignificantlyblockedtheeffectsofTGF-β1，whiletheinhibitorofAktpathwayhadnoeffects.Conclusions:1、TGF-β1markedlyinducestheexpressionofHMGA1inLX-2HSCcells.2、TGF-β1markedlyinducestheactivationofERK1/2andAktpathwayinLX-2HSCcells.3、TGF-β1promotestheexpressionofHMGA1throughERK1/2pathway.KeyWords:TGF-β1；HMGA1；ERK1/2；Akt；LX-2HepaticStellateCells；LiverFibrosis目录第1章前言1第2章材料与方法42.1实验材料42.1.1细胞株42.1.2主要试剂和材料42.1.3主要仪器设备52.2实验方法62.2.1主要试剂的配制方法6第4章讨论21第5章结论25致谢26参考文献27攻读学位期间的研究成果30综述31中英文缩略词表缩语HSC-LX2英文全称Hepaticstellatecell-LX-2中文译名人肝星状细胞-LX-2TGF-β1Transforminggrowthfactor-β1转化生长因子β1HMGA1HighMobilityGroupAT-hook1高迁移率族蛋白A1α-SMAα-smoothmuscleactinα-平滑肌肌动蛋白E-cadepithelialcadherinE-钙黏素DMEMDulbeccosmodifiedeaglesmedium杜氏改良培养液FBSFetalbovineserum胎牛血清PBSPhosphatebuffersolution磷酸盐缓冲溶液ECMExtracellularmatrix细胞外基质HFHepaticfibrosis肝纤维化EMTepithelial-mesenchymaltransitions上皮-间质转化RNaseRibonuclease核糖核酸酶mRNAMessageribonucleicacid信使核糖核酸PCRPolymerasechainreaction聚合酶链反应SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠RT-PCRReversetranscriptionPCR逆转录PCRDNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸β-actinbeta-actin肌动蛋白PAGEPolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳DMSODimethylsulphoxide二甲基亚砜ODOpticaldensity吸光度PMSFPheylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟第1章前言肝纤维化（Hepaticfibrosis，HF）是一种由于细胞外基质（Extracellularmatrix，ECM）的沉积与降解失衡导致的