苯系物含量测定.pptVIP

博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 苯系物含量的测定 ——高效液相色谱法 教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生 实验课时：6学时 课程类型：专业实验课 课程要求：必修 每组人数：2人 实验目的 了解高效液相色谱仪的结构； 学习高效液相色谱仪的基本操作方法； 掌握标准曲线法的原理和分析方法。 实验原理 苯系物指苯、甲苯、二甲苯等混合物。它们可采用反相高效液相色谱进行分析，选用C-18烷基键合相作固定相，甲醇和水作流动相对样品进行分离。由于苯系物在紫外区有较强的吸收，故采用UV检测器进行检测。 本实验采用标准曲线法进行定量分析。 仪器和试剂 1. 高效液相色谱仪；UV检测器；微量进样器；抽滤装置 2. 储备液：分别取0.30ml苯、0.40ml甲苯和0.50ml二甲苯于10ml比色管中，用甲醇稀释至刻度备用 实验内容 1. 色谱操作条件 色谱柱： C-18柱，长15cm，内径3mm 柱温： 30℃ 流动相： 甲醇:水＝75:25 流量： 1ml/min 检测波长：254nm 进样量： 20uL 取样量： 60~80uL 分析时间：11min 2. 按照测量条件调节好仪器，预热45min。 3. 溶液的配制 分别取0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ml的储备液和2.0ml的样品溶液于10ml比色管中，用甲醇稀释至刻度。 4. 测量 待仪器状态稳定后，对标准液和样液分别进样，采用色谱工作站绘制出各溶液的色谱图。 数据记录和处理 1. 记录色谱操作条件 2. 通过色谱工作站对各标准液的色谱图采用标准曲线法进行定量分析，绘制出标准曲线。 3. 根据样液的色谱图，从标准曲线上找出样品中各组分对应的量。 注意事项 流动相使用前必须经过脱气； 实验开始前应先用流动相进行色谱柱饱和； 采用微量进样器进样时应先驱除气泡； 实验结束后采用蒸馏水清洗进样器； 实验结束后应用纯溶剂清洗色谱柱。 高效液相色谱仪操作步骤 使用HPLC前，须采用专用过滤系统对溶剂和样品进行过滤和脱气。所用溶剂等级应为色谱纯，水应为超纯水。 开启HPLC时，先运行变色龙工作站，再打开仪器电源，并进行联机。 设置溶剂混合比例，再设置溶剂流速，自动运行高压泵。若流路中有气泡，应先排除气泡。然后在设定条件下进行柱平衡，时间为30~60min。 开启氘灯进行预热，时间为45min。 根据样品测量条件和要求建立测量方法文件（含程序文件、方法文件和序列文件）。 当准备工作完成后，即可进样分析。 进样采用HPLC专用进样针。进样体积应为定量环体积的3~4倍。 进样时先将进样针插入进样器，再右旋进样阀门至采样位，将样品全部打入，再将进样阀左旋回原位，等5s后将进样针取出。 必须等前一样品分析结束后才能进下一个样品进行分析。进样时应按照初始设定分析顺序进样。 所有样品测量完后，可先关HPLC，再用色谱工作站进行数据处理。 关机时应先关氘灯电源，然后清洗仪器。 首先用超纯水（用注射器注射）清洗进样阀，两个位置各清洗一次。 若分析过程中使用缓冲液作为溶剂，则应先用超纯水冲洗色谱柱约30min，再用甲醇冲洗色谱柱约30min；若只用有机溶剂和水作为溶剂，则可直接用甲醇冲洗色谱柱40~60min。冲洗色谱柱时溶剂流量均为1ml/min。 仪器清洗完后，先停流，关闭高压泵，再关仪器电源。 数据分析完毕后，再关闭色谱工作站。 上一页 下一页 * * 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 仪器结构 输送系统 进样系统 分离系统 检测系统 数据处理 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 高压泵输送 色谱柱 进样器 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 高效液相色谱操作与控制界面 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 进样状态切换示意图 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃行之。精心整理，欢迎收藏 博学之，审问之，慎寺之，明辩之，笃