微生物设计性实验.pptVIP

从土壤中分离筛选一类能分解油污的细菌 基本思路 取一定量被油污污染过的的土壤，对土样进行溶解处理。多次处理，以求除尽上层的油污，得到下层土壤沉淀并嗮干。 实验设计步骤 一、取土样 二、制备土壤稀释液 三、制备麦选择性培养基 四、样品的分离纯化 五、筛选的结果预计 二、制备土壤稀释液1、称土样1g于盛有99mL无菌水的三角瓶中、充分振荡，此即为10-2浓度的菌悬 2、用无菌移液管吸取悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管。用移液管吹吸三次，摇匀，此即为10-3浓度。 3、同样方法，依次稀释到10-4、10-5 、10-6、10-7。注：稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行。  三、制备选择性培养基 制备只能利用油污为唯一碳源的选择性培养基来获得能分离油污的这种功能菌。 四、样品的分离纯化 1、倒制平板 在超净工作台的酒精灯火焰旁倒制平板。 2、涂布平板 将上述培养基的5个培养基的四个平板分别标上10-3、10-4、10-5、10-6、10-7五种稀释度。 取5只无菌吸管，分别从土壤的稀释液中各取 0.1ml。（重复以上步骤两次） 一一对号放于已标记好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻涂布均匀。 3、倒置培养 将培养基平板倒置，与30-32℃温箱中培养2天。4、观察 观察培养后培养基。 五、预估 1、若培养基上长出了一种单菌落，则这种菌就是所需的菌，则对此菌种做保藏以待利用。 2、假如没有则预示从土壤中分离不到所需菌。则可从别途径采取样品或是水中或是深层土壤。 * 接着用灭菌水稀释土壤（适量），充分摇匀，用玻棒蘸取土壤溶液，在经过灭菌的特制培养基培养皿上划线，然后进行培养。 注：土壤中微生物特别丰富，含有放线菌、真菌等，在培养过程中，可以使用选择性培养基，得到单一菌落。 一、取土 选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。 1、先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次。 2、然后取2～10cm处的土壤。（盛土的容器应是无菌的） 3、将5点样品约1kg充分混匀，除去杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。 4、取10～15g，称重后烘干，置干燥器中冷却后再次称重。 *