枯草芽孢杆菌SNUB16对棉花种子萌发和幼苗生长影响.docVIP

分类号： 本科生毕业论文（设计） 枯草芽孢杆菌SNUB16对棉花种 子萌发和幼苗生长的影响 学院名称： 生命科学学院 专业名称： 生物科学 年级班别： 级生科1班 姓 名： 指导教师： 二○一○年五月 枯草芽孢杆菌SNUB16对棉花种子萌发和幼苗生长的影响 摘 要 为了探讨草芽孢杆菌SNUB16对棉花种子萌发和幼苗生长的影响以及抗枯萎病的效果，用不同浓度的枯草芽孢杆菌SNUB16菌液、棉花枯萎病菌菌液及它们的混合液分别处理棉花种子和土壤，做盆栽观察，记录各盆棉花出苗数、患病株数、幼苗鲜重和干重.试验结果表明，无论采用哪种接菌方法，枯草芽孢杆菌SNUB16均能增加棉花种子的出苗率，而且可显著降低棉花的患病率、增加棉花幼苗的鲜重和干重.接种棉花枯萎病菌后，棉花种子的出苗率显著降低，幼苗的患病率升高，幼苗的鲜重和干重显著降低.接种枯草芽孢杆菌SNUB16和棉花枯萎病菌的混合菌液,对棉花各项生理指标的影响与对照组差异不显著. 关键词 枯草芽孢杆菌SNUB16，棉花枯萎病菌，棉花，枯萎病，出苗率 近年来，由于棉花市场的开放，棉花价格上涨，播种面积不断增加，种植棉花已成为棉区农民增加收入的增长点.棉籽的发芽出苗，包括幼苗的生长繁殖深受棉花枯萎病的影响，连年出现大面积缺苗、死苗、低产现象，给农业生产带来严重的影响[1~2]. 棉花枯萎病病原菌是棉花枯萎病菌，属土壤传播的维管束病害，防治上有很大的难度.当前国内外在抗病育种、农业措施和化学防治等方面做了大量工作，但由于这些防病措施的种种弊病和不足，收效不尽人意 [3~4]，迄今尚缺乏理想的高产丰产品种和有效药剂，且化学药剂对环境的污染日益突出，生物防治日益受到重视[5~8].因此，了解棉花枯萎病菌的作用及其拮抗菌的作用机制，有着重要的意义，能为开发防治棉花枯萎病的生防治剂提供理论依据. 为了探索棉花枯萎病的生物防治途径，前人们已经分离得到了对棉花枯萎病菌有抑制作用的荧光假单胞菌和产芽孢细菌[13]，其中芽孢杆菌的表现最好（芽孢杆菌是一类需氧或兼性厌氧菌，其抗菌谱广泛，对多种病原真菌、细菌均有较强的抑制作用.它通过产生多种抗生素，包括脂肽类、肽类、磷脂类、多烯类化合物、氨基酸类、核酸类和类噬菌体颗粒等，起到抑制多种植物及人类病原菌的作用[3]），且芽孢杆菌所产芽孢易于保存，适合加工成各种形态的菌剂，在生物防治应用上有较大的潜力.因此，作者用枯草芽孢杆菌SNUB16进行种子的盆栽防病试验，采用土壤接菌和种子接菌两种方法，就枯草芽孢杆菌SNUB16菌株对棉花枯萎病菌的拮抗作用及其机制进行研究，以期为开发防治棉花枯萎病的生物防治剂提供必要的试验依据[9~12]. 1 材料和方法 1.1 实验菌株 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）SNUB16，棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum）PF1，由本院应用微生物学实验室提供. 1.2 培养基 1.2.1 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 牛肉膏5g，蛋白胨 10g NaCl 5g ，去离子水ml,固体培养基加琼脂20 g，加热溶解用5mol/LNaOH调pH至7.4在高压蒸汽灭菌min [14]. 1.2.2 土豆培养基 马铃薯去皮切成薄片(切好立即放在水内，否则马铃薯容易氧化变黑)，每200克马铃薯加自来水1000毫升，置电炉上，用纱布过滤，至1000毫升，加20克，加琼脂2克，21度、30分钟灭菌，，，，， 10，10，从， 10，103个稀释度各取100ul加在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上，用灭菌的L形玻棒涂匀，每浓度重复3次.28 0C倒置培养48 h后，统计平板上的菌落数，然后计算活菌数. 1.5 棉花枯萎病菌培养和菌液制备 1.5.1 菌种活化 将保存在斜面上的菌种用接种环以划线形式接入土豆汁琼脂斜面培养基上，28 0C培养5天活化. 1.5.2 菌液制备 从活化斜面取菌，在茄瓶土豆培养基斜面划线接种，在28 0C培养7天，用无菌水洗下孢子. 1.5.3 活孢子数测定 将孢子液用10倍系列稀释法稀释至，，，，， 10，10，从， 10，103个稀释度各取100ul加在土豆汁琼脂培养基平板上，用灭菌的L形玻棒涂匀，每浓度重复3次.28 0C倒置培养3-4天后，统计平板上的菌落数，然后计算活菌数. 1.6种子接菌对棉花种子萌发和幼苗生长的影响 1.6.1 制盆栽土壤 先将全部土壤混合均匀，再分装在直径20-22cm的塑料花盆中，每盆装入等量土壤（先预试确定重量），7个处理，重复3次，共21盆，编号1-21. 1.6.2 浸种 用枯草芽孢杆菌SNUB1