SV40大T抗原在人脑肿瘤中表达.docVIP

SV40大T抗原在人脑肿瘤中的表达 作者：甄海宁　章翔　张志文　黄文晋　张萍　梁景文　刘先珍 【关键词】SV40 　　关键词:SV40;大T抗原（Tag）;脑肿瘤;p53;pRb 　　摘要:目的探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原（Tag）的表达及与抑癌蛋白p53，pRb的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义.方法采用免疫共沉淀结合银染色及Western印迹法检测65例人脑肿瘤及8例正常人脑组织中Tag的表达，并对18例和15例Tag阳性瘤组织分别检测Tag-p53和Tag-pRb复合物的形成.结果SV40Tag在人脑肿瘤中广泛表达，阳性率为66%（43/65），而8例正常人脑组织均无Tag表达，二者差异显著（Plt;0.05）;分别检测18例和15例Tag阳性瘤组织，均发现Tag可与p53，pRb形成特异性复合物.结论SV40Tag的表达与人脑肿瘤的发生有一定关系;SV40Tag与p53，pRb形成特异性复合物并导致其失活，可能是SV40致人脑肿瘤发生的一个重要机制. 　　Keywords:simianvirus40（SV40）;largetumorantigen（Tag）;brainneoplasms;p53;pRb 　　Abstract:AIMTostudytheexpressionofSV40earlyre-giongenecodingproduct，thelargetumorantigen（Tag），anditsinteractionwithtumorsuppressorsp53andpRbinhumanbraintumorigenesis.METHODSTagwasinvesti-gatedbyimmunoprecipitationfollowedbysilverstainingandWesternblotin65casesofhumanbraintumorsand8casesofnormalbraintissues.Tag-p53andTag-pRbcomplexeswerescreenedbyimmunoprecipitationandWesternblotin18and15Tagpositivetumortissuesrespectively.RESULTSSV40Tagwasexpressedgenerallyinhumanbraintumorswithapositiverate66%（43/65），whilein8normalbraintissuesTagwasnegativeinallcases.Therewasasignificantdifferencebetweenthem（Plt;0.05）.Tag-p53complexwasdetectedinallof18Tagpositivetumors，andTag-pRbcom-plexwaspositiveinallofthe15Tagpositivetumors.CON┐CLUSIONSV40Tagexpressionisassociatedwithhumanbraintumorigenesis.Theinactivationofp53andpRbduetotheformationofTag-p53andTag-pRbcomplexesmightpos-siblybeanimportantmechanisminthepathogenesisofhu-manbraintumors. 　　0引言 　　近年有关猴病毒40（simianvirus40，SV40）与人脑肿瘤及其他某些类型肿瘤发生的病因学关系，已成为肿瘤学研究的一个新热点.但对于SV40是否存在于人脑肿瘤组织中，以及是否表达癌蛋白大T抗原（Tag）仍无统一认识.已知人体细胞是SV40的半允许细胞，即使SV40确实存在于人脑肿瘤组织中，是否具有致瘤性，以及机制如何，对此国内外均未见报道［1，2］.我们采用免疫共沉淀结合银染色及Western印迹法，检测了SV40早期区域基因编码产物Tag在人脑肿瘤中的表达，并发现Tag可与抑癌蛋白p53及pRb形成特异性复合物，进一步讨论了SV40与人脑肿瘤发生的病因学关系. 　　1材料和方法 　　1.1材料人脑肿瘤65例及正常人脑组织8例新鲜标本均由全军神经外科研究所标本库提供.脑肿瘤按1990年WHO标准分类，包括胶质瘤45例，脑膜瘤和垂体腺瘤各10例.以表达SV40Tag的HFSV40细胞株作为阳性对照. 　　1.2方法 　　1.2.1免疫共沉淀［3］组织标本或培养细胞经裂解处理后，分别用SV40Tag单抗、p53单抗或pRb多抗及A蛋白-sepharose珠沉淀目的蛋白.阴性对照用无关肝癌小鼠腹水代替上