tgf-β1促进肺鳞癌及肺肉瘤样癌emt vm形成的研究-study on tgf - β 1 promoting emt vm formation in squamous cell carcinoma of lung and sarcomatoid carcinoma of lung.docx

学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密□。  （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日  中文摘要 近几年我国吸烟人数不断增加，人们生存的环境也不断恶化，肺癌的发病 率也随之上升，在全国恶性肿瘤的总发病率已占据了首要位置，成为对人健康 和生命产生威胁最大的恶性肿瘤之一。在近几年肺癌的发病年龄也逐渐年轻化， 在男性肺癌发病率和死亡率均占第一位，女性发病率、死亡率仅次于乳腺癌居 第二位，威胁人类的健康显而易见。 目的 研究肺肉瘤样癌（pulmonary sarcomatoid carcinoma，PSC）和肺鳞癌（lung squamous cell carcinoma, LSCS ）中 转 化 生 长 因 子 -β1 （ transforming growth factor-β1 ，TGF-β1）、EMT相关蛋白的表达情况，分析其相关性。并探讨肺肉 瘤样癌中TGF-β1与血管生成拟态（vasculogenic mimicry，VM）的关系及对临床 生存、预后的影响。通过体外TGF-β1诱导肺鳞癌细胞发生EMT表型转变及细胞 运动能力的影响，并阐述EMT提高肺鳞癌细胞的侵袭迁移能力、VM形成的相关 机制。 方法 1) 分析天津医科大学肿瘤医院 1995 年 1 月至 2010 年 12 月在手术前没有接受 放化疗治疗的肺肉瘤样癌患者 41 例、肺鳞癌患者 79 例的临床资料，总结其 随访结果。分别对肺肉瘤样癌和肺鳞癌进行 TGF-β1 和 EMT 相关指标 E-cadherin、Vimentin、Twist1 进行免疫组化染色，分析两组中 TGF-β1 与 EMT 相关蛋白的关系。并对人肺肉瘤样癌病例组织切片 41 例进行 CD31 和 PAS 双重染色，分析在肺肉瘤样癌中 TGF-β1 与 VM 之间的预后关系。最后对 VE-cadherin、MMP-2 蛋白进行免疫组织化学染色，分析肺肉瘤样癌中 VM 形成的相关机制。 2) 通过培养 SK-MES-1 肺鳞癌细胞株，并利用 TGF-β1 对肺鳞癌细胞进行诱导。 观察是否发生 EMT，同时促进了 VM 的形成。利用细胞功能学的一些方法， 观察经过诱导后的肺鳞癌细胞的侵袭能力变化、迁移速度改变，还有三维管 道形成能力。 3） 应用 Western Blot、RT-PCR、免疫荧光染色实验从蛋白和 mRNA 水平检测 E-cadherin、Vimentin 表达情况，从机制上探究肺鳞癌细胞经诱导后发生 I  EMT，从而促进 VM 的形成。 4） Western Blot 检测 VE-cadherin 作为血管生成拟态形成的关键，在 TGF-β1 诱 导前后的表达差异。 5） 利用明胶酶谱来检测 TGF-β1 诱导后肺鳞癌细胞的基质金属蛋白酶-2、基质 金属蛋白酶-9 活性的影响。 结果 1） 肺肉瘤样癌、肺鳞癌 EMT 相关蛋白、TGF-β1 的表达 通过对 41 例肺肉瘤样癌、79 例肺鳞癌的 EMT 相关蛋白免疫组化染色， 发现与肺鳞癌相比，肺肉瘤样癌的 E-cadherin 表达下降，Vimentin 表达明显 增强，两组间比较差别具有统计学意义。随后通过 TGF-β1、Twist1 的免疫 组化染色，发现在肺肉瘤样癌和肺鳞癌两组中，TGF-β1 与 Twist1 的差别具 有统计学意义。 2） TGF-β1 蛋白与血管生成拟态的形成有关 41 例肺肉瘤样癌病例中 TGF-β1 的阳性表达率为 43.9%（18/41）。VM 阳性组 TGF-β1 的阳性表达率为 80%（8/10）；VM 阴性组 TGF-β1 的阳性表 达率为 32.3%（10/31）。TGF-β1 在 VM 阳性组和 VM 阴性组的阳性表达率 的差别具有统计学意义。生存分析表明，TGF-β1 阳性组较阴性组的总体生 存时间短。 3） TGF-β1 对肺鳞癌细胞的诱导通过体外三维培养证实其促进了肺鳞癌细胞血 管生