猪早期胚胎发育及滋养层和内细胞团分化机理的相关研究-生物学;发育生物学专业论文.docxVIP

Classified Index：Code：10224Confidential：noN0．：1 209120Di s sertation for the Doctoral DegreeStudies on Porcine Early Development and the Mechanisms of Trophoblast／Inner Cell MassDifferentiationCandidate：Shichao Liu Supervisor：Professor Liu ZhonghuaDegree Category：Doctor of ScienceCollege：College of Life ScienceFirst level discipline：B iologySecond level discipline：Development B iologyHarbinChinaJune2015万方数据目录＼蜊燃摘要I英文摘要一III1前言．．11．1哺乳动物早期胚胎发育概述．11，1．1小鼠早期胚胎发育进程的概述11．1．2小鼠着床前胚胎发育滋养层与内细胞团分化概述11．2小鼠着床前胚胎发育滋养层与内细胞团分化机理11．2．1小鼠胚胎滋养层与内细胞团分化的重要转录因子l1．2．2 ROCK和Hippo通路对小鼠滋养层和内细胞团分化的调控．．11．3猪早期胚胎发育滋养层与内细胞团分化研究现状11．3．1猪滋养层与内细胞团分化的研究现状11．3．2猪胚胎体外基础培养体系的概况12材料与方法12．1实验材料12．1．1组织材料．12．1．2主要试剂．12．1．3主要仪器．12．1．4试剂的配制．12．2实验方法12．2．1猪体外各时期卵母细胞／胚胎的获取一12．2．2猪各时期体内胚胎的获取．．12．2．3小鼠体内各时期卵母细胞／胚胎的获取．．12．2．4免疫荧光．．12．2．5蛋白质免疫印记杂交．．12．2．6胚胎体外培养、处理及检测．．12．2．7免疫共沉淀．12．2．8猪胚胎RNA的提取12．2．9猪CDX2和OCT4编码区克隆．．12．2．10实验数据分析l2．2．11实验所用引物和抗体汇总13结果与分析13．1猪胚层分化标记因子的筛选及其表达模式的追踪13．1．1滋养层标记因子CDX2在猪早期胚胎中表达模式的追踪13．1．2 SOX2在猪囊胚内细胞团中特异性表达．13．1．3 SOX2与CDX2在猪内细胞团和滋养层细胞中显示出相互排斥的表达模式1I万方数据东北农业大学理学博士学位论文3。1。4 SOX2特异性表达模式的建立过程与猪滋养层和内细胞团特化过程同时发生13．1．5谱系分化相关因子在猪体内胚胎中的时空分布．13．2利用CDX2和SOX2作为胚层标记评价胎牛血清对猪早期胚胎发育培养体系的影响．13．2．1 FBS提高猪体外胚胎孵化率和囊胚细胞数13．2．2 FBS促进ICM增殖和进一步分化．．13．3猪着床前胚胎极性建立的延迟导致CDX2起始表达晚于小鼠l3．3．1 CDX2在猪早期胚胎起始表达晚于小鼠．13．3．2 ROCK．YAP信号通路调控CDX2的表达13．3．3猪早期胚胎细胞极化发生晚于小鼠13．4 CDX2和OCT4在猪早期胚胎中的相互作用——在猪早期胚胎中过表达CDX2的研究13．4．1 CDX2的过表达会导致猪胚胎发育阻滞．13．4．2 CDX2过表导致胚胎发育阻滞是由于OCT4蛋白的缺失．．13．4．3在猪早期胚胎中CDX2在翻译后水平上抑制OCT4．．13．4．4早期胚胎中CDX2促进OCT4定位从细胞核向胞质转变．13．4。5 CDX2可能通过竞争机制抑制了OCT4对DNA的可触性14讨{仑14．1猪早期胚层分化分子基础与小鼠中不同．．14．2 SOX2在猪和小鼠多潜能网络调控研究中的意义。14．3关于FBS对于猪体外胚胎发育胚层分化影响的讨论．．15结论1致谢．1参考文献．．1攻读博士学位期间发表的学术论文1II万方数据CONTENTSCONTENTSAbstract in Chinese．．．．．I Abstract in English．．．．．． ．．．．．．．．．III1 Introduction．．．．．．．．． ．．．．11．1 Summary of mammalian pre—implantation develpment．11。1．1 Summary of mouse pre—implantation development progress．．1 1．1．2 Summary of the differentiation between trophoblast and inner cell mass during mouse pre-impla