tat-cytoglobin融合蛋白促进皮肤创伤愈合和抗肝纤维化初步研究-preliminary study on tat - cyto globin fusion protein promoting skin wound healing and anti-hepatic fibrosis.docxVIP

摘要细胞珠蛋白（Cytoglobin，Cygb）是Kawada等在大鼠肝星状细胞中发现的一 种六配位血红素球蛋白，分子量为21.4 kDa。目前研究表明Cygb具有过氧化物酶 活性和清除氧自由基的功能，并能通过调控Cygb基因的表达抑制肝纤维化。但 Cygb作为一种胞浆蛋白，且在细胞表面无Cygb受体的情况下，外源Cygb无法主 动进出细胞，发挥其抗氧化、抗炎症及抗肝纤维化等生物学功能。本论文结合 穿膜肽TAT的穿膜作用和Cygb的生物学功能，制备及探讨TAT-Cygb融合蛋白在 促进皮肤创伤愈合及抗肝纤维化方面的作用。首先，通过乳糖诱导表达E. coli BL21/pET22b-TAT-Cygb中的TAT-Cygb融合 蛋白，经CM阳离子交换层析、S-100分子筛层析、G-25分子筛脱盐等分离纯化 过程，以及SDS、LC/MS和Western blot鉴定，得到纯度95%、浓度为3.273 mg/mL、过氧化物酶比活力为（422.63±3.17）U/mg的TAT-Cygb，并通过免疫细 胞化学鉴定TAT-Cygb的穿膜能力；其次，利用H2O2氧化应激损伤模型和超氧化 物阴离子荧光探针证明TAT-Cygb对细胞的保护作用和治疗氧化损伤的作用，并 能降低细胞内超氧化物阴离子的水平，而无穿膜能力的Cygb无法缓解已氧化损 伤的细胞；再次，利用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型验证TAT-Cygb