伯胺双膦酸药物的hplc测定和大黄中蒽醌类物质的gc-ms测定-hplc determination of primary amine bisphosphonates and gc - ms determination of anthraquinones in rhubarb.docxVIP

符号说明英文缩写英文全称中文全称HPLCHigh performance liquid chromatography高效液相色谱UVUltra-violet spectra紫外光谱GCGas chromatography气相色谱MSMass spectrometry质谱法m/zMass/charge ratio质荷比BPsBisphosphonates双膦酸盐类药物 EDTAEthylene diaminetetraacetic acid乙二胺四乙酸 FMOC-Cl9-Fluorenylmethyl chloroformate芴甲氧羰酰氯 EI-MSElectron ionization mass电子电离质谱OPAo-Phthalaldehyde邻苯二甲醛TICTotal ion current scan全离子扫描LODLimit of detection检测限rCorrelation coefficent相关系数RSDRelative standard deviation相对标准偏差 DNFB2,4-Dinitrofluorobenzene2，4-二硝基氟苯 ESIElectrospray ionization电喷雾电离DADDiode array detector二极管阵列检测器ICIon chromatography离子层析ELSDEvaporative light—scattering detector蒸发光散射检测器FLDFluorescence detector荧光检测器VisVisible absorption spectrometry可见分子吸收光谱IPCIon chromatography离子对色谱法1伯胺双膦酸药物的 HPLC 测定和大黄中蒽醌类物质的 GC-MS 测定 摘要第一部分：伯胺双膦酸药物的 HPLC 测定 双膦酸盐类药物是一种高效骨吸收抑制剂，临床上用于骨骼上各种相关疾病（如骨质疏松症、变形性骨炎以及恶性高钙血等）的治疗。 该类药物大部分为口服给药，生物利用度低，而由于其极性很强，不 便于分离富集，在反相色谱柱上难以保留。并且大多数的双膦酸盐类 药物没有生色团，所以无法采用常规紫外检测器或荧光检测器直接进 行测定。阿仑膦酸钠、帕米膦酸二钠以及奈立磷酸都属于双膦酸药物的伯 胺类化合物，能有效地抑制骨吸收，副作用小，安全性好，在临床上 广泛用于骨质疏松症、变形性骨炎以及肿瘤相关性骨病变等疾病。因 此建立快速检测该类药物的分析方法具有重要的理论和现实意义。本 文使用常用的氨基酸柱前衍生化试剂芴甲氧羰酰氯（FMOC-Cl）与三 种双膦酸药物反应，再经 HPLC-UV 法实现药物的定量检测。目的：以 FMOC-Cl 为柱前衍生化试剂，与三者分别进行反应，建 立阿仑膦酸钠、帕米膦酸二钠、奈立膦酸柱前衍生化 HPLC-UV 的测定 方法，分别测定阿仑膦酸钠片、注射用帕米膦酸二钠及奈立膦酸原料药的含量。方法：流动相为甲醇-乙腈-0.4%EDTA( 5:25:70 )，氢氧化钠2调节流动相 pH 至 7.16；采用色谱柱 LinkSi C18 (250×4.6 mm，5.0 μm)；流速 v=1.0mL·min-1；检测波长 264nm。结果：三种药物在 1.0-40.0μg·mL-1 范围内均呈现良好的线性（r＞0.9995），各药物的回归方程跟检测限分 别为：阿仑膦酸钠：y =0.941x-0.697，检测限 0.2 μg·mL-1。帕米膦酸二 钠：y =0.447x-0.240，检测限为 0.5 μg·mL-1。奈立膦酸：y=0.730x-0.316， 检测限为 0.1 μg·mL-1。结论：该 HPLC-UV 法测定三种双膦酸药物灵 敏，准确度高，可以用来测定各原料药及制剂的含量。第二部分：大黄中蒽醌类物质的 GC-MS 测定 大黄属于我国传统中药，具有广泛的药理作用。尤其对于实热便秘、食积停滞、腹痛、急性阑尾炎、急性传染性肝炎、急性结膜炎等 疾病有很好的疗效。现代药理实验表明大黄中所含的蒽醌类化合物具 有广谱的生物活性，也是其疗效的主要组成部分。已有文献对大黄的 化学成分进行了研究，最主要的活性成分为芦荟大黄素、大黄酸、大 黄素、大黄酚、大黄素甲醚这些游离蒽醌。目前对大黄蒽醌类化合物 的测定主要采用 HPLC 法。本文则用 GC-MS 法，对大黄中的四种蒽醌 化合物经过全扫描，确定其选择离子后进行定量检测，专一性好，灵 敏度高，为该类化合物生物样品的分析提供了参考。同时通过 EI-MS 法对四种分析物的主要裂解途径及可能产生的碎片离子进行分析，为 进一步研究四种化合物的结构修饰以及该类药物的新药研发提供了实 验依据。目的：建立 GC-MS 同时测定大黄中大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素和大黄素含量的方法。