硅烷化GC-MS检测烟叶中的有机酸.pptVIP

硅烷化GC-MS法检测烟草中的挥发性和半挥发性有机酸 学生：傻 摘 要 采用硅烷化GC-MS法对烟草中的挥发性与半挥发性有机酸进行分析，共鉴定出26种挥发酸和半挥发酸，并分别对其进行定量检测结果表明：该方法的标准曲线的相关系数都在0.999以上，回收率为80.51%-118.60%, 重复性的相对标准偏差(RSD)为0.81%-4.66%。应用该方法检测云南不同生态区的八个烤烟品种，结果显示其中的挥发性有机酸差异不显著，半挥发性有机酸差异显著。 一. 材料与仪器 烟草样品 2008年预实验烤烟样和种植于云南各生态区的8个烟草样品（见表8）。 试剂及标样 二氯甲烷、N、O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）；甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、2-甲基丁酸、3-甲基丁酸、戊酸、3-甲基戊酸、4-甲基戊酸、己酸、庚酸、苯甲酸、辛酸、壬酸、十二酸、十三酸、十四酸、十五酸、十六酸、十七酸、亚油酸、油酸、亚麻酸、十八酸、苯乙酸甲酯（内标）、山梨酸（内标）、肉桂酸(内标)，以上试剂及标样均为AR（分析纯试剂）。 仪器 气相色谱-质谱联用仪（美国PE Clarus600）、超声波萃取仪（KQ-1500VDE型，昆山市超声仪器有限公司）、电子天平（Sartorius，0.01mg）。 二. 结果与分析 2.1 衍生化试剂对标样用量选择 衍生化试剂对标样有机酸总量的影响 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 5μl 10μl 15μl 20μl 25μl 30μl 35μl 40μl 衍生化试剂用量 有 机 酸 总 量 系列1 2.1 衍生化试剂对标样用量选择 由图可知，在衍生化试剂用量8个水平因素中，BSTFA用量对有机酸总量的影响差异不明显，其总量相对标准偏差仅为1.21%。故认为5μL以上的BSTFA用量即可使所加入的有机酸完全衍生化。另因5μL BSTFA量太小不易操作，因此选用加入10μL BSTFA为最佳用量。 2.2 衍生化试剂对烟样用量选择 2.2 衍生化试剂对烟样用量的选择 由图可知，在衍生化试剂用量8个水平因素中，BSTFA用量对有机酸总量（μg/g烟样）的影响有明显差异，其用量在5-20μl时，其总量呈指数般增加，在20μl时达到了最大值，而在20-40μl时，其总量变化则不明显，相对标准偏差仅为0.60%。故认为20μL以上的BSTFA用量即可使得烟样中的有机酸完全衍生化。另因各烟草样品的成分各有差异，为保证各烟草样品中的有机酸都能完全硅烷化，选用加入30μL BSTFA为最佳用量。 2.3 衍生化介质选择 2.3 衍生化介质的选择 由图可知，当二氯甲烷为衍生化介质时，有机酸总量最高，乙醚次之，丙酮则最低，这可能是由于丙酮分子羟基上的氢原子较活泼，容易与衍生化试剂发生反应消耗大量BSTFA的缘故。 2.4衍生化时间的选择 2.4 衍生化时间的选择 由图可知,衍生化时间从10～40min，有机酸总量由快到慢逐渐上升，在40min时出现第一个拐点；而从40～80min，其总量变化趋势不明显，相对标准偏差仅为1.79%，故认为其总量在衍生化40min以后即可被完全硅烷化。但为了充分保证有机酸能完全衍生化，取60min为最佳衍生化时间。从衍生化时间对各个有机酸的衍生化效率（各衍生化时间下有机酸的半定量值除以60 min时各有机酸的比值）来看，低级脂肪酸在较短的时间内即可完全衍生化，而高级脂肪酸则需要较长的时间，这是由于低级脂肪酸的羧基比高级脂肪酸的更活泼，更容易与衍生化试剂反应的缘故。 2.5 衍生化温度的选择 2.5 衍生化温度的选择 由图可知，在衍生温度为5-90℃之间，有机酸总量无明显差异，其相对标准偏差仅为1.68%，由此可以说明，在此温度范围内，衍生温度对有机酸总量的影响较小，均能完全地完成衍生化反应。因此本着简便、易操作的原则，选取常温为最佳衍生化温度。 2.6 超声时间的选择 2.6 超声时间的选择 由图可知，超声波萃取时间对有机酸总量（μg/g烟样）有显著的影响，在超声萃取的七个水平因素中，随着萃取时间的延长，有机酸总量明显增加，并在50 min时达到最大值，而60 min时有机酸总量与50 min时相比无明显变化。故可认为50min的超声萃取时间即能将有机酸最大程度地从烟草颗粒中萃取出来，并将50min作为最佳的超声萃取时间。 三. 结果与讨论 3.1 标准曲线的建立 准确移取混合标样贮备液0.05、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml分别置于8个10ml容量瓶中，并加入混合内标贮备液各0.5ml（山梨酸：0.5024mg/ml；10.2050mg/ml），二氯甲烷定容至刻度，摇匀，即可得到8个不同浓度的有机酸标准溶液