MF05二代测序快速DNA建库试剂盒NGSFastDNALibrary-聚合美.DOC

M5 NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent使用说明书 产品名称 单位 货号 M5 NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent 24T MF053-01 M5 NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent 96T MF053-04 【储存条件】 -20?C保存，干冰运输。 【试剂盒组分】 MF053-01(24T) MF053-04(96T) 10x End Repair Buffer 200μl 800μl End Repair Enzyme Mix 48μl 192μl Ligase and Nick Repair Buffer 400μl 2x800μl T4 DNA Ligase 48μl 192μl Bst DNA Polymerase 48μl 192μl HiFidelity 2xPCR Master Mix 0.625ml 2x1.25ml 10x Primer Mix ( 5μM each) 150μl 600μl 【产品简介】 本二代测序快速DNA建库试剂盒（Ion torrent）提供了构建DNA文库需要的酶预混体系及反应缓冲液，包含除接头以外的所有成分，制备的文库可用于Ion torrent PGM、Ion Proton二代测序平台的测序。Ion torrent平台快速DNA建库试剂盒包括三个步骤：末端修复、接头连接和PCR富集。和常规建库方法相比，该试剂盒将多个步骤进行了合并，整个建库过程只有两个纯化步骤，因此显著降低了起始模板DNA的最少需求量，缩短了文库构建时间。另外，试剂盒采用高保真DNA聚合美进行文库富集，无偏好的PCR扩增，扩大了序列覆盖区域，可以高效的制备用于Ion Torrent二代测序平台的DNA文库。 【自备仪器、试剂和耗材】 磁力架：建议使用Life公司的磁力架。 DNA纯化回收试剂盒：建议使用聚合美磁珠法DNA纯化回收试剂盒（货号MF050） 样本接头引物试剂盒 无水乙醇，EB（10mM Tris-HCl，pH8.0），去离子水（pH在7.0-8.0）。 反应管：建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管。枪头：建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染。 【实验前准备及注意事项】 1．避免试剂盒中Buffer的反复冻融，建议首次使用时将Buffer进行分装保存。酶在使用完尽快放回-20?C保存。 2．PCR产物因操作不当极易产生污染，导致实验结果不准确，建议将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化区隔离，并使用专门的移液器，定期对各实验区进行清洁。 【DNA建库流程示意图】 从起始材料到得到DNA文库只需2小时15分钟。 起始材料：5ng-1μg 打断的双链DNA，溶于EB（10mM Tris-HCl，pH8.0）或去离子水中。 DNA纯度要求：OD260/OD280=1.8-2.0。 【DNA末端修复反应】 1．向200μl PCR管中加入以下成分，用枪头将上述溶液轻轻混匀，瞬时离心使所有组分收集到管底。 试剂名称 体积 10x End Repair Buffer 6μl End Repair Enzyme Mix 2μl Fragmented DNA X (10ng-1μg) RNase-Free Water Up to 60μl 2．将管子置入PCR仪中，热盖打开，反应程序如下： 25?C 20 min. 70?C 10 min. 然后置于4?C。 【Adaptor 连接】 建议使用聚合美的adaptor进行连接，也可以选择使用Life、Kapa公司的adaptor，具体连接方法可以参考各公司的产品说明书。以下为使用聚合美adaptor进行连接的操作步骤： 1. 向上述反应液中直接加入以下试剂，用枪头将上述试剂混匀，短暂离心，使溶液收集到管底。 试剂名称 体积 Ligase and Nick Repai