苯并噻唑衍生物k75的抗细胞增殖活性及其构效关系分析-analysis of anti-cell proliferation activity and structure-activity relationship of benzothiazole derivative k75.docxVIP

苯并噻唑衍生物K75的抗细胞增殖活性及其构效关系研究摘要类风湿性关节炎是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身免疫性疾病，具有患病率高、进行性加重、难于根治的特点，最终导致不可逆性关节损伤、丧失工作能力和生活自理能力，严重危害人类健康。RA的病因和发病机制尚未完全阐明，自身反应性T细胞的活化增殖和成纤维细胞样滑膜细胞的异常增殖是两个关键环节。甲氨喋呤、来氟米特等抗细胞增殖类小分子免疫调节剂以及新型生物制剂，如肿瘤坏死因子(tumornecrocefactor,TNF)-α拮抗剂、白细胞介素(IL)-l和IL-6拮抗剂、抗CD20单抗以及T细胞共刺激信号抑制剂等的应用极大改善了RA患者的临床治疗效果。但是，不同患者的药物敏感性存在显著个体差异，治疗过程中发现单一疗法效果不明显时，还需给予联合、轮换或序贯治疗。发现更多的治疗靶点和全新结构的先导化合物，将为患者提供更多的选择与希望。本课题前期发现一种新型苯并噻唑衍生物K75可显著抑制小鼠和人的T细胞增殖，有望作为抗类风湿性关节炎等自身免疫性疾病的先导化合物。但尚不清楚哪些化学基团决定着K75的抗增殖活性，成为进一步设计筛选高活性衍生物的主要障碍。为此，本研究在设计合成了21种K75衍生物的基础上，观察它们对T细胞和FLS增殖的影响，旨在分析K75的构效关系，为下一步的药物结构改造奠定基础。本研究的主要结论如下：1.实现和优化了原代人成纤维细胞样滑膜细胞的体外分离培养，采用CCK-8法检测成纤维细胞样滑膜细胞在微孔板中的生长曲线，掌握其生长特性为批量检测小分子化合物的抗细胞增殖活性提供了重要的技术保障。2.收集和合成了苯并噻唑小分子K75及其21种衍生物，分别采用流式细胞绝对计数法和CCK-8法检测了它们对T细胞和成纤维细胞样滑膜细胞的增殖抑制活性(GI50)以及对静息T细胞的毒性(CC50)。3.构效分析结果表明：(1)K75单独的苯并噻唑基团并不足以产生活性；(2)K75结构中N1’N2’-S1N3和5’-OH结构或基团是维持活性所必需保留的；(3)在保留这两个结构的前提下，改变环己烷或苯环部位的结构会影响抑制活性的强弱。提示保留两个必需结构的前提下，可以尝试更多的结构改造，寻找更高活性的衍生物。4.研究发现IL-1β、TNF-α及TLR3的配体PolyI:C可刺激FLS分泌IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra)。K75单独作用于FLS，不能促进IL-1Ra的分泌，与TLR配体、IL-1β联合使用时，可进一步IL-1Ra的分泌，并呈剂量效应关系。关键词：苯并噻唑衍生物；成纤维细胞样滑膜细胞；T淋巴细胞；抗细胞增殖；类风湿性关节炎Anti-cellProliferationandStructure-ActivityRelationshipStudiesoftheBenzothiazolederivativeK75AbstractRheumatoidarthritisisakindofchronicsystemicautoimmunediseasecharacterizedbyarticularsynovialinflammation,andwithhighprevalenceandprogressingseverityanddifficulttoachievearadicalcure.Eventuallythediseaseleadtoirreversiblejointdamage,lossofabilitytowork,theabilityoflifeself-care,andseriousharmhealthofhuman.TheetiologyandpathogenesisofRAhasnotyetbeenfullyelucidated,theproliferationandactivationofautoreactiveTcellandabnormalproliferationoffibroblastlikesynoviocytearethetwokeysforit.Theapplicationofsmallmoleculeimmunomodulatorwiththeabilityofanti-cellproliferationsuchasmethotrexate,leflunomideandthenewbiologicalagentssuchasantatgonisoftumornecrosisfactor-α，Interleukin-1,Interleukin-6,anti-CD20monoclonalantibodyandTcellcostimulatorysignalinginhibitorsareimprovingtheclinicaltreatmentofRApat